目的:采用组织形态学和电镜观察的方法了解根管治疗失败后持续感染根管微生物的组织结构和定植模式。方法:采用显微根尖手术切除根尖标本,通过组织学染色观察根尖周组织的组织学状态和微生物的形态及其在根尖的定植情况。根尖标本纵向劈开后在扫描电镜下分别观察牙本质面和牙根表面的细菌生物膜形态和分布。结果:(1)6例进行组织学染色的根尖标本中,有5例可观察到菌斑附着于根管壁表面,并沿牙本质小管侵入到牙本质深层,浸入深度由100μm至500μm不等。6例标本的根尖周组织均形成了根尖囊肿,有1例标本根尖囊肿的囊腔内有异物颗粒形成的结晶体,另有1例标本在根尖囊壁中出现胆固醇晶体沉积,表现为狭长的针形裂隙。(2)根管内壁牙本质面和根尖牙骨质面在扫描电镜下均可观察到菌斑生物膜结构,胶原纤维网形成支架结构,密集的细菌群落镶嵌于胶原纤维网支架之中,被结构致密的胞外多糖基质覆盖包裹,构成生物膜。细菌组成以球菌和杆菌为主。结论:微生物在根管治疗后持续感染的根管内牙本质面和牙根外牙骨质面以菌斑生物膜的方式定植,并可侵入牙本质小管达500μm,是造成根管治疗失败的重要原因。胆固醇晶体和根管内异物是导致根管治疗失败的非微生物因素。