新城疫病毒class Ⅰ和class Ⅱ微型基因组的构建及其复制效率差异性比较

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Truth_Tiger
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  新城疫(Newcastle disease virus,ND)是一种能够感染多种鸟类的烈性传染病,尤其对鸡、鹅等常见家禽具有高度的传染性和致死性。目前,新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDv)只有一个血清型,而其诸多的基因型主要划分为两个大的谱系,即class I和classII。本实验分别以新城疫9a5b(class I)病毒和L0Sota(Class II)病毒基因组骨架为平台,插入绿色荧光蛋白(gteen uorescent protein,GFP)作为报告基因替代病毒的整个编码区,只保留与病毒复制、转录和病毒包装相关的调控区域Leadef和Tmiler,构建获得的微型基因组DNA片段反向插入反向遗传载体TVT(0.0)中,从而成功构建了两株病毒的微型基因组质粒。同时,将相应毒株的NP、P、L三个基因分别克隆进pcl-neo载体中,成功构建了三个辅助质粒的真核表达系统。通过将微型基因组和辅助质粒共转染BSRT7/5 T7-5细胞,我们发现在相同转染条件下,无论使用哪一种辅助质粒,Class II型微型基因组的报告基因的表达效率要远远高于class I型微型基因组。实验结果暗示class I NDV转录复制系统的运作效率要明显低于Class II NDV。
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