【摘 要】
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本试验采用旋毛虫肌幼虫43ku ES抗原基因构建核酸疫苗,检测其免疫效果.首先根据Genbank登陆的旋毛虫肌幼虫43ku ES抗原基因序列设计引物,在上下游分别引入KpnⅠ和BamHⅠ的酶
【机 构】
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吉林农业大学动物科学技术学院,吉林省动物微生态制剂工程研究中心,吉林长春,130118
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本试验采用旋毛虫肌幼虫43ku ES抗原基因构建核酸疫苗,检测其免疫效果.首先根据Genbank登陆的旋毛虫肌幼虫43ku ES抗原基因序列设计引物,在上下游分别引入KpnⅠ和BamHⅠ的酶切位点.用PCR技术扩增肌幼虫43ku ES抗原基因,选择阳性克隆菌提取质粒及真核表达载体pVAX1进行相同酶切,将产物回收后连接并转化入DH5α中.转染后诱导表达.将4-6周龄BALB/C小鼠随机分组,肌注100μL质粒DNA.每组免疫三次,每次间隔1周.末次免疫后一周,每只小鼠攻旋毛虫肌幼虫,30天后,处死.从脾脏和淋巴结中分离T细胞和B细胞用流式细胞仪测定各细胞因子的表达水平.结果显示,重组真核表达质粒组的抗体水平明显高于其他两组,差异显著,各细胞因子表达水平也明显增高.重组真核表达质粒pVAX1:Ts 43组旋毛虫肌幼虫减虫率最高可达52.1％;重组真核表达质粒pVAX1-Ts45组旋毛虫肌幼虫减虫率最高可达39.5％；重组真核表达质粒pVAX1-Ts43与重组真核表达质粒pVAX1-Ts45混合使用组旋毛虫肌幼虫减虫率最佳,达到了75.9％.以上结果表明,旋毛虫肌幼虫43ku Es抗原基因在小鼠体内得到表达,诱导小鼠产生免疫反应对抗旋毛虫感染,与pVAX1-Ts45联合效果更佳,为研制预防旋毛虫病核酸疫苗奠定了试验基础.
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