猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建

来源 :中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mashangdenglu998
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目的: 为研究猪IL-2生物学功能及其应用前景。方法: 本实验采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2)基因,RT-PCR产物进行T-A克隆、测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamH I酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamH I酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2。Not I酶切pSY538/pIL-2后,得到含有双启动子LP2和EP2的猪IL-2基因片段,将其亚克隆到含有LacZ基因的pSY681载体上,筛选正向插入的重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2。结果: 测序结果表明,克隆的豫南黑猪IL-2基因为482bp,包含1个完整读码框(465bp),与GenBank中其它5条猪IL-2基因核苷酸同源性为99.9%。重组质粒pSY681/pIL-2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。结论:本研究成功构建了重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2,为猪IL-2生物学功能的进一步研究和开发奠定基础。
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