重组猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备

来源 :中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fafa1234567
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根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Primer 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG19-T-swFcγRIIb1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2蛋白分子基因片段,PCR产物经Kpn I+EcoR I双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32a中,构建了三种猪Fcγ RIIB剪接异构体原核表达载体pET-EY、pET-AY、pET-BY,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下成功表达了分子量约为36kD、29kD、27kD融合蛋白表达,纯化后的融合蛋白分别免疫小鼠制备鼠源血清。ELISA结果显示抗体效价为1∶5120,1∶5120,1∶10240。免疫印迹结果显示制备的多克隆抗体可以与融合蛋白特异性结合。
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