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根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的ORF2(s基因)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株的ORF6(N基因)核酸序列，经DNA sis 2.0比较分析，分别筛选出TGEVS基因和PEDVN基因相对保守区，利用PrimerPremier=5.0软件设计两对引物。多重RT-PCR得到与预期大小相一致的约858bp和511bp的产物，特异性试验表明，多重RT-PCR不与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪瘟病毒和猪轮状病毒反应，特异性良好;敏感性试验表明多重RT-PCR能检测10 TVID50/mL疫苗毒。将猪传染性胃肠炎、轮状病毒二联活疫苗和疑似腹泻猪粪便分别在ST细胞和Vero-E6细胞上进行增殖，经RT-PCR和金标试纸条检测，分别盲传5代、10后成功分离出TGEV和PEDV病毒。