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通过对Genbank登录的CSFV.PRRSV和JEV的核苷酸序列进行比对分析，找出CSFV的E2基因，PRRSV的Nsp2基因和JEV的E基因为相对保守区域。利用生物学软件在保守序列分别设计一对引物，目的片断大小分别为CSFV(482bp)、PRRSV(576bp)和JEV(375bp)，通过对PCR反应条件的优化，确定了最佳引物浓度、最佳Mg2+浓度和最佳退火温度。将传统三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步，从而大大节省临床检测时间，同时又能通过一个反应体系对CSFV、PRRSV及JEV三种猪主要RNA病毒病进行检测。经验证该方法具有良好的敏感性、特异性和稳定性。因此，该方法对CSFV、PRRSV和JEV的快速准确诊断以及流行病学调查提供技术手段。