论文部分内容阅读
翻译起始是基因表达的主要调控步骤之一,需要很多翻译起始因子的参与。eIF3a是eIF3最大的亚基,它在翻译起始的所有步骤中都发挥了重要作用。近来的研究表明eIF3a可以调控一系列mRNA的翻译,这些mRNA参与到肿瘤生成、侵袭与转移、细胞周期调控、药物耐药和DNA修复等途径。本研究证明了eIF3a通过内部核糖体进入位点(cellular internal ribosome entry sites,IRES)调控mRNA的翻译。笔者首先使用生物信息学分析了受eIF3a调控的DNA修复蛋白mRNA的5 UTR序列，并构建不同的检测启动子和IRES活性的荧光素酶报告基因质粒，体外转录并纯化后，转染H1299细胞，检测其荧光素酶活性以确定RPA2 5 UTR是否有启动子或者IRES活性。使用该方法鉴定了RPA2 5 UTR有一个新的IRES元件，并将该元件定位于翻译起始位点的上游-50到-150bp处。进一步使用紫外交联和Biotin-streptavidin Pull Down等方法证明eIF3a通过与该IRES直接结合来抑制RPA2的翻译。此外，研究还表明eIF3a通过该调控机制来调控H1299和NIH3T3细胞对顺铂的耐药。