病毒性心肌炎心肌细胞Caveolin-3的表达及银杏叶提取物干预的研究

来源 :中华医学会第十八次全国儿科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuyi9021
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目的:观察病毒性心肌炎大鼠心肌细胞内小凹蛋白-3(Caveolin-3,Cav-3)、TGF-β1、smad3蛋白表达量变化,观察银杏叶提取物(EGB)对Cav-3、TGF-β1/smad3信号的传导过程的作用.方法:取出生24h内的SPF清洁级SD大鼠胎鼠,暴露心脏,取前1/5-1/3剪下,应用酶消化法制备大鼠原代心肌细胞.通过MTT法检测银杏叶提取物对心肌细胞的毒性.将大鼠原代心肌细胞分为三组:A.对照组;B.病毒组:A组基础上对心肌细胞加柯萨奇病毒B3(CVB3)感染;C.银杏叶提取物组:B组基础上,后续加入银杏提取物.通过免疫组化方法检测大鼠心肌细胞内Cav-3、TGF-β1、smad3蛋白表达量变化.结果:通过倒置显微镜观察发现,心肌细胞在培养至72h后,心肌细胞贴壁成簇分布,并出现成片搏动,搏动频率在18-45次/min,且呈同步收缩状态,节律规则,搏动有力,证实大鼠心肌细胞原代培养成功。各浓度银杏叶提取物对心肌细胞均没有毒性,各药物浓度作用细胞24h,48h后细胞存活率均大于75%,后续实验银杏叶提取物浓度为1750Ng/mL;通过免疫组化方法检测心肌细胞Cav-3,TGF-p1、smad3表达量发现,对照组心肌细胞有小量的Cav-3,TGF-p1、smad3蛋白的阳性表达,病毒组心肌细胞的Cav-3,TGF-p,smad3表达量明显增高,银杏叶组心肌细胞的Cav-3,TGF-p,、smad3表达量较病毒组降低,且通过阳性面积可以看出各组细胞形态,病毒组大鼠心肌细胞体积缩小,变圆,银杏叶组大鼠心肌细胞形态饱满,且有触角伸出,通过Luzex-F型图像分析系统测量显色灰度值发现病毒组Cav-3,TGF-团、smad3表达量较对照组明显增加,差异显著p<0.05,银杏叶组Cav-3、TGF-p1、smad3表达量明显低于病毒组,差异显著p<0.05.结论:银杏叶提取物对心肌细胞无毒性,而且良好的体外抗CVB3感染作用,其作用机制可能为通过下调Cav-3,TGF-p1,smad3表达量实现,即通过作用于Cav-3,TGF-p1及smad3蛋白的表达得以实现。Cav-3及TGF-p1/smad3信号传导过程有望成为临床治疗病毒性心肌炎的靶点,EGB有望用于临床治疗病毒性心肌炎。
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