【摘 要】
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目的：本文以拟穴青蟹(Scylla paramamosain)为研究对象,对其肌肉过敏原-肌质钙结合蛋白(Sarcoplasmic calcium binding protein,SCP)进行重组表达,探究重组SCP的免疫结合
【机 构】
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集美大学食品与生物工程学院 厦门市海洋功能食品重点实验室 福建省海洋功能食品工程技术研究中心 水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心 福建厦门361021
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目的：本文以拟穴青蟹(Scylla paramamosain)为研究对象,对其肌肉过敏原-肌质钙结合蛋白(Sarcoplasmic calcium binding protein,SCP)进行重组表达,探究重组SCP的免疫结合活性.方法：参考NCBI数据库中SCP相关序列设计引物,通过PCR扩增得到目的基因,将目的基因与表达栽体pET-22b连接后转化至大肠杆菌中进行表达,重组蛋白经Sephacryls-200凝胶过滤柱层析纯化,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测和免疫印速(Western blot)分析重组SCP的免疫结合活性.结果：对拟穴青蟹的肌肉组织RNA进行反转录,通过PCR扩增出579bp目的基因产物；将该基因与表达栽体连接后转化至大肠杆菌中,在30℃条件下经0.5mmol/L IPTG诱导8h,重组蛋白经柱层析纯化后的SDS-PAGE显示其分子量约为21 kDa；通过与兔抗青蟹SCP多克隆抗体、蟹类过敏患者血清的免疫印迹反应分析,证实重组表达SCP具有IG/IgE免疫结合活性.结论：本研究成功表达了拟穴青蟹SCP,重组SCP具有良好的IgG/IgE结合活性,可望用于甲壳类食物过敏诊断试剂的开发.
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