【摘 要】
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目的：分离出具有一定抗癌活性的毛蚶蛋白组分,以人乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,研究细胞毒作用.方法：以新鲜毛蚶软体部分为原材料,经低温水提、硫酸铵分级沉淀获得毛蚶蛋白活性
【机 构】
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北京中医药大学中药学院,北京100102
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目的：分离出具有一定抗癌活性的毛蚶蛋白组分,以人乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,研究细胞毒作用.方法：以新鲜毛蚶软体部分为原材料,经低温水提、硫酸铵分级沉淀获得毛蚶蛋白活性组分Ⅲ；进一步利用FPLC 系统结合阴离子交换层析及凝胶柱层析法对其进行分离,获取毛蚶抗癌蛋白组分,命名NS；以人乳腺癌细胞MCF7 为研究对象,倒置相差显微镜观察NS 组分对癌细胞生长的影响,Giemsa 染色观察NS 组分对癌细胞及核形态的影响,流式细胞术测定NS 组分作用MCF7 细胞后对细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot 检测与细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果：NS 组分对人乳腺癌细胞MCF7 生长具有一定的抑制作用；倒置相差显微镜下,NS 组分作用MCF7 细胞12h,部分细胞收缩变圆、脱落,24h、48h 后细胞脱落现象更加明显； Giemsa 染色发现,NS组分处理12h 后细胞出现有丝分裂相增加,继而出现多核或核碎裂等现象；流式细胞术检测NS 组分对MCF7 细胞周期的影响, 发现其主要引起细胞G2-M 期阻滞； AnnexinV-PI 双染结合流式细胞术检测NS 组分对MCF7 细胞凋亡的影响,发现随着药物作用时间的延长,细胞凋亡比例逐渐增大.Western blot 检测发现NS 组分作用MCF7 细胞后p53 及procaspase-3 蛋白表达量均上调.结论：毛蚶抗癌蛋白NS 组分体外对人乳腺癌细胞MCF7 的细胞毒作用主要通过引起细胞发生G2-M 期阻滞、诱导细胞凋亡实现的,期间伴随p53 及procaspase-3 蛋白表达上调.
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