【摘 要】
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目的 探究GP73是否通过上皮间质转化(EMT)影响肝癌细胞对奥沙利铂耐药.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting实验检测GP73在肝癌患者癌旁和癌组织中的表达变
【机 构】
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牡丹江医学院附属第二医院,黑龙江牡丹江 157011;中国人民武装警察部队特色医学中心,天津 300162
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目的 探究GP73是否通过上皮间质转化(EMT)影响肝癌细胞对奥沙利铂耐药.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting实验检测GP73在肝癌患者癌旁和癌组织中的表达变化;Western blotting检测GP73在SMMC7721、Bel-7404和HepG2细胞株中表达差异;采用浓度梯度递增方法建立HepG2奥沙利铂获得性耐药细胞株,通过MTT法检测奥沙利铂(2、4、8、16、32μmol/L)对亲本细胞和耐药细胞活性的影响;采用Western blotting实验检测HepG2亲本细胞和耐药细胞中GP73及上皮间质转化相关分子N-cadherin、Vimentin、E-cadherin的表达;利用siRNA/质粒分别干扰或过表达GP73,采用MTT法检测奥沙利铂(2、4、8、16、32 μmol/L)对干扰GP73前后耐药细胞活性的影响;通过Western blotting实验检测Vimentin、N-cadherin和E-cadherin的表达.结果 与癌旁组织比较,GP73 mRNA和蛋白水平在肝癌组织中均显著上调(P＜0.05);与SMMC7721和Bel-7404GP73细胞比较,GP73在HepG2细胞中显著高表达(P＜0.05).奥沙利铂对亲本和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(12.03±0.06)、(19.26±0.04)μmol/L;干扰GP73后奥沙利铂对耐药细胞的抑制率升高,8、16、32 μmol//L浓度组差异显著(P＜0.05).与亲本细胞比较,耐药细胞中GP73、N-cadherin及Vimentin蛋白表达显著上调(P＜0.05),而E-cadherin蛋白表达显著下调(P＜0.05).干扰GP73后,Vimentin、N-cadherin表达显著下调,E-cadherin的表达显著上调(P＜0.05);过表达GP73后,Vimentin、N-cadherin表达显著上调,E-cadherin的表达显著下调(P＜0.05).结论 GP73对人肝癌细胞奥沙利铂耐药具有促进作用,其作用机制可能与调节EMT相关.
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