【摘 要】
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目的:探究苦参新醇F对黑素细胞氧化应激及自噬的影响.方法:以PIG1细胞株为研究对象,将细胞分为对照组、模型组、阳性对照(小檗碱,5 μmol/L)组以及苦参新醇F低、中、高剂量(2
【机 构】
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上海中医药大学附属龙华医院皮肤科 上海 200032;上海中医药大学 上海 201203;南京中医药大学附属苏州市中医医院 江苏 苏州 215000
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目的:探究苦参新醇F对黑素细胞氧化应激及自噬的影响.方法:以PIG1细胞株为研究对象,将细胞分为对照组、模型组、阳性对照(小檗碱,5 μmol/L)组以及苦参新醇F低、中、高剂量(26、52、78 μmol/L)组.除对照组外,其他各组加入1.0 mmol/L过氧化氢(H2O2)干预24 h,以诱导氧化应激损伤.H2O2刺激后,各药物组给予相应药物干预24 h.CCK8法检测细胞活力;ELISA检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平;透射电镜观察自噬小体;免疫荧光检测E-钙黏素蛋白表达;Western blot检测氧化应激及自噬相关蛋白的表达,包括:Beclin-1、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2).结果:①与模型组相比,苦参新醇F不同剂量组的细胞活力均显著升高(P＜0.01),且高剂量组细胞活力明显高于低剂量组、阳性对照组(P＜0.05).②与模型组相比,苦参新醇F不同剂量组的ROS、MDA水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),GSH水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01);且高剂量组的ROS、MDA水平低于低剂量组、阳性对照组(P＜0.05,P＜0.01),GSH水平高于低剂量组(P＜0.05).③与模型组相比,苦参新醇F不同剂量组的自噬小体数目均显著增多(P＜0.05,P＜0.01);且中、高剂量组的自噬小体数目明显多于低剂量组(P＜0.05,P＜0.01).④苦参新醇F中、高剂量组E-钙黏素表达较模型组显著升高(P＜0.05,P＜0.01),且明显高于低剂量组(P＜0.05,P＜0.01).⑤与模型组相比,不同剂量苦参新醇F干预后,Beclin-1、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、Nrf2、P62蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:苦参新醇F可能通过上调Nrf2-P62信号通路,促进黑素细胞自噬,从而抵抗氧化应激损伤.
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