【摘 要】
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运用鸟枪克隆术,从环状芽胞杆菌B2301基因组中克隆出乳糖酶编码基因,其完整读框大小为5133 bp,编码1710个氨基酸残基,不含典型细菌信号肽序列,与已有报道的 β-半乳糖苷酶的
【机 构】
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天津科技大学 化工与材料学院,天津,300457天津科技大学 生物工程学院,工业发酵微生物教育部重点实验室,天津,300457;Biotechnology Platform,Agricultural
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运用鸟枪克隆术,从环状芽胞杆菌B2301基因组中克隆出乳糖酶编码基因,其完整读框大小为5133 bp,编码1710个氨基酸残基,不含典型细菌信号肽序列,与已有报道的 β-半乳糖苷酶的最高一致性为93.6％.初步表达和纯化了此乳糖酶,重组乳糖酶在50℃(ONPG)/60℃(乳糖)和pH 6.0～6.5下表现出最高催化活性,Zn2+、Fe2+、Cu2+、EDTA和SDS对重组酶表现出不同程度的抑制作用;该酶在50和55℃下催化合成低聚半乳糖的V max分别为2.21和2.47 g/(L·h),K m分别为10.46和14.37 g/L.所获得的乳糖酶具有以乳糖为底物酶法合成低聚半乳糖的优良应用属性,可为后续针对此酶的高效表达与工业化应用奠定基础.
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