【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA LCPAT1(LncRNA LCPAT1)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制.方法 将人成骨细胞系hFOB 1.19和OS细胞系Saos-2、U-2OS、MG-63置于含10％FBS的RPMI-1640培养基,37℃、5％CO2条件下培养至对数成长期.采用iScriptTMcDNA合成试剂盒从1μg分离的总RNA中生成cD-NA,使用FastStart Universal SYBR Green Master试剂盒行qRT-PCR反应.采用qRT-PCR法检测人成骨
【机 构】
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武汉市红十字会医院骨科,武汉430015
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目的 探讨长链非编码RNA LCPAT1(LncRNA LCPAT1)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制.方法 将人成骨细胞系hFOB 1.19和OS细胞系Saos-2、U-2OS、MG-63置于含10％FBS的RPMI-1640培养基,37℃、5％CO2条件下培养至对数成长期.采用iScriptTMcDNA合成试剂盒从1μg分离的总RNA中生成cD-NA,使用FastStart Universal SYBR Green Master试剂盒行qRT-PCR反应.采用qRT-PCR法检测人成骨细胞系hFOB 1.19和OS细胞系Saos-2、U-2OS、MG-63中LncRNA LCPAT1表达,采用LipofectamineTM3000对OS细胞系Saos-2分别转染pcDNA3.1-LCPAT1、LCPAT1-shRNA及对照质粒,并分成LCPAT1上调表达组(pcDNA3.1-LCPAT1组)、LCPAT1沉默表达组(sh-LCPAT1组)及对照组(NC组),采用qRT-PCR实验验证转染效率.CCK-8实验测定细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞凋亡能力,Transwell实验测定细胞侵袭能力,蛋白印迹实验测定EMT相关蛋白表达.结果 OS细胞系LncRNA LCPAT1相对相对表达量高于正常人成骨细胞系hFOB 1.19(P<0.05).pcDNA3.1-LCPAT1组LncRNA LCPAT1相对表达量为16.3±1.4,NC组LncRNA LCPAT1相对表达量为8.2±1.2,sh-LCPAT1组LncRNA LCPAT1相对表达量为2.1±0.5,pcDNA3.1-LCPAT1组LncRNA LCPAT1相对表达量高于NC组(P<0.05),sh-LCPAT1组LncRNA LCPAT1相对表达量低于NC组(P0.05),转染48、72及96 h后,pcDNA3.1-LCPAT1组OD490值高于NC组及sh-LCPAT1组(P均<0.05).流式细胞术示,pcDNA3.1-LCPAT1组细胞凋亡率为(4.1±0.4)％,NC组为(8.7±0.6)％,sh-LCPAT1组为(13.4±0.8)％,pcDNA3.1-LCPAT1组细胞凋亡率低于NC组及sh-LCPAT1组(P均<0.05).Transwell实验结果显示,pcDNA3.1-LCPAT1组侵袭细胞数为(354±19)个,NC组为(172±13)个,sh-LCPAT1组为(68±9)个,pcDNA3.1-LCPAT1组侵袭细胞数多于NC组(P<0.05),sh-LCPAT1组侵袭细胞数少于NC组(P<0.05).pcDNA3.1-LCPAT1组E-cadherin蛋白相对表达量低于NC组(P<0.05),pcDNA3.1-LCPAT1组N-cadherin、Snail、Twist1蛋白相对表达量高于NC组(P均<0.05).sh-LCPAT1组E-cadherin蛋白相对表达量高于NC组(P<0.05),sh-LCPAT1组N-cadherin、Snail、Twist1蛋白相对表达量低于NC组(P均<0.05).结论 LncRNA LCPAT1可促进骨肉瘤细胞增殖和侵袭,抑制凋亡;其机制可能与促进EMT过程有关.
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