【摘 要】
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免疫球蛋白是鱼类适应性免疫中主要的效应因子之一,研究鱼类免疫球蛋白对鱼类疾病的免疫防控尤为重要。本研究利用PCR与RACE技术克隆获得青鲫(Carassius auratus indigentiaus)分泌型免疫球蛋白Z(secretory immunoglobulin Z, sIgZ)重链基因cDNA全长序列(基因序列登录号:MZ274344.1),青鲫sIgZ重链基因cDNA序列全长2083
【机 构】
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湖南文理学院生命与环境科学学院水生动物重要疫病分子免疫技术湖南省重点实验室微生物技术创新团队常德市农业生物大分子研究中心
【基金项目】
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湖南省科技厅自然科学基金项目(2022JJ30033); 国家自然科学基金项目(32172965; 31972835);
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免疫球蛋白是鱼类适应性免疫中主要的效应因子之一,研究鱼类免疫球蛋白对鱼类疾病的免疫防控尤为重要。本研究利用PCR与RACE技术克隆获得青鲫(Carassius auratus indigentiaus)分泌型免疫球蛋白Z(secretory immunoglobulin Z, sIgZ)重链基因cDNA全长序列(基因序列登录号:MZ274344.1),青鲫sIgZ重链基因cDNA序列全长2083 bp,其开放阅读框长1668 bp,编码一条由556个氨基酸组成的肽链,相对分子质量为61.59 kD,理论等电点为7.03。青鲫sIgZ重链基因结构由1个可变区(VH), 4个恒定区(CH1-CH4)以及1个分泌型的尾部(secretory tail,Sectail)构成。在GenBank中进行同源序列检索,青鲫sIgZ氨基酸序列与其他鱼类IgZ的相似性依次为团头鲂(Megalobrama amblycephala)(63.17%)、草鱼(Ctenopharyngodon idella)(60.82%)、鲤(Cyprinus carpio carpio)(52.98%)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)(37.06%)和金头鲷(Sparus aurata)(35.01%)。利用MEGA 5.1软件进行多重序列比对分析,采用邻接法构建遗传系统进化树,发现青鲫sIgZ基因与同属鲤科(Cyprinidae)鱼类的IgZ聚为一支,青鲫sIgZ与团头鲂的sIgZ亲源关系最近。通过qPCR检测青鲫不同组织中sIgZ基因的表达,发现青鲫头肾中sIgZ基因的表达量最高,中肾、脾和肝脏次之。利用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对青鲫进行浸泡感染, sIgZ在头肾、脾脏、中肾、肝、肠、鳃和皮肤中的表达水平在感染的28d内先升高后降低,sIgZ的相对表达量在黏膜免疫组织(肠和皮肤)中达到峰值的时间要早于系统免疫组织(头肾和脾脏),肠和皮肤中sIgZ在峰值时的相对表达量显著高于头肾中sIgZ在峰值时的相对表达量,实验结果显示,青鲫sIgZ在肠和皮肤黏膜免疫组织中可能发挥重要的免疫功能。
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