探讨微小RNA-92a(miR-92a)靶向调控Krüppel样因子4(KLF4)对结肠癌细胞增殖的影响。
方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测21例结肠癌和对应癌旁正常组织及4种结肠癌细胞(HT29、SW480、SW620、HCT116)中miR-92a的表达水平。选取结肠癌细胞株HCT116、SW620分别瞬时转染miR-92a mimic、inhibitor，在构建miR-92a高表达和抑制表达的细胞模型后，采用CCK-8比色法检测细胞增殖活性，运用流式细胞仪检测细胞周期，采用Western blotting方法检测KLF4的蛋白表达水平，采用双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。
结果结肠癌组织中miR-92a的表达水平为(0.648±0.489)fmol/μg总RNA，显著高于对应癌旁正常组织的(0.064±0.062)fmol/μg总RNA，差异具有统计学意义(t＝－5.420，P<0.001)。4种人结肠癌细胞株中HCT116的miR-92a表达水平相对最低，SW620的表达水平相对最高。上调miR-92a表达，HCT116细胞72 h增殖活性高于阴性对照组(0.919±0.014∶0.765±0.025)，差异具有统计学意义(t＝－9.309，P＝0.001)，S期细胞增多[(41.670±0.461)%∶(38.703±0.554)%，t＝－7.127，P＝0.002]，KLF4蛋白表达水平下调(0.460±0.048∶0.758±0.109，t＝22.865，P＝0.028)；抑制miR-92a表达，SW620细胞72 h增殖活性低于阴性对照组(0.608±0.011∶0.713±0.005)，差异具有统计学意义(t＝15.920，P<0.001)，S期细胞减少[(31.935±0.365)%∶(34.955±0.465)%，t＝8.849，P＝0.001]，KLF4蛋白表达水平上调(0.694±0.121∶0.479±0.044，t＝－5.246，P＝0.034)。miR-92a-3p mimic与KLF4 3′UTR野生型质粒共转染HCT116细胞后，与阴性对照组比较，上调细胞miR-92a表达能使Firefly荧光素酶活性略有降低，但差异无统计学意义(t＝0.878，P＝0.429)。结肠癌组织中miR-92a表达与KLF4蛋白表达之间有一定的负相关趋势，但无统计学意义(r＝－0.163，P＝0.699)。
结论miR-92a在结肠癌组织中高表达，可能通过促进细胞周期从G0-G1期向S期转化而增强结肠癌细胞增殖能力。结肠癌细胞中高表达miR-92a可能通过抑制KLF4蛋白表达发挥调控作用，但KLF4不是miR-92a的直接作用靶基因。