【摘 要】
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目的:研究二甲双胍(metformin)在少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)分化过程中的作用,并对其分子机制进行初步探讨.方法:使用免疫吸附法直接分离纯化OPC后诱导培养,通过免疫荧光染色对细胞进行鉴定.在不同浓度二甲双胍处理OPC后,使用CCK8检测细胞活性;通过免疫荧光染色、流式细胞分析、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测二甲双胍对OPC分化中细胞数量、mRNA和蛋白质水平的影响.结果:使用免疫吸附法可分离出高纯度OPC;CCK8检测结果显示在10
【机 构】
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青岛大学基础医学院 青岛266071;军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所 北京100850;军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所 北京100850;青岛大学基础医学院 青岛266
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目的:研究二甲双胍(metformin)在少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)分化过程中的作用,并对其分子机制进行初步探讨.方法:使用免疫吸附法直接分离纯化OPC后诱导培养,通过免疫荧光染色对细胞进行鉴定.在不同浓度二甲双胍处理OPC后,使用CCK8检测细胞活性;通过免疫荧光染色、流式细胞分析、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测二甲双胍对OPC分化中细胞数量、mRNA和蛋白质水平的影响.结果:使用免疫吸附法可分离出高纯度OPC;CCK8检测结果显示在100 μmol/L浓度以内,二甲双胍对细胞无毒性;免疫荧光染色结果显示,二甲双胍处理OPC后,PDGFRα+ OLIG2+阳性细胞数明显增加,且MBP+细胞数显著增加;流式细胞分析结果显示,PDGFRα+细胞数显著增加;实时荧光定量PCR结果显示,OPC分化相关基因Mag、Mbp等的mRNA水平显著增加;蛋白质印迹结果显示,分化相关蛋白OLIG2和MBP表达增加.机制上,少突胶质细胞系Oli-neu、OPC分别经二甲双胍处理5 min后,RAS、p-MEK、p-ERK蛋白量显著增加.结论:二甲双胍通过RAS-MEK-ERK信号通路促进少突胶质前体细胞的分化.
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