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目的
构建高效表达的DAZL重组腺病毒载体系统，观察DAZL基因对人脐带间充质干细胞(HUMSCs)向男性生殖细胞分化的影响。
方法1.用Gateway腺病毒系统制备含DAZL及EGFP基因的重组腺病毒pAd-DAZL-EGFP。2.用组织块贴壁法获得HUMSCs，用Ad-EGFP-DAZL感染第3代生长良好的HUMSCs，观察感染效率及细胞生长情况，确定最佳感染复数(MOI)和感染时间。3.通过形态学、反转录(RT)-PCR和免疫荧光鉴定DAZL基因异位表达诱导HUMSCs向男性生殖细胞方向分化的结果。
结果成功构建表达DAZL的腺病毒，病毒滴度为1.0×109 pfu/mL。最佳的感染条件为：MOI＝100，感染时间＝8 h，该条件下的感染率为(43.00±1.52)%。HUMSCs在感染DAZL重组腺病毒后形态发生了明显的变化，第4－6天由成纤维细胞变成圆形，少数变圆的细胞在2～3周后变成蝌蚪状，阴性对照组及空白对照组细胞则未发生类似变化。RT-PCR和免疫荧光均证实实验组表达精原细胞的标志STELLA(DDPA3)、VASA(DDX4)、c-kit、DAZL和OCT4(POU5F1)，阴性对照组及空白对照组则只表达内参基因。
结论DAZL重组腺病毒感染HUMSCs后能诱导HUMSCs向男性生殖细胞方向分化，证实DAZL基因是精子形成过程中的关键基因。