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植物名称籼稻(Oryza sativa ssp.Indi-ca)品种湖大118-2以及品系湖大5216和湖大5213。2 材料类别成熟胚。3 培养条件以MS为基本培养基。愈伤组织诱导培养基附加:(1)2,4-D 1.0 mg·L-1(单位下同)+NAA 1.0;(2)2,4-D 2.0+NAA 2.0+6-BA 0.1;(3)2,4-D 2.0+NAA 2.0+6-BA 0.5;同时添加1.0%甘露醇,3.0%蔗糖,1.6%琼脂。芽诱导培养基附加:(1)6-BA 2.5;(2)6-BA 5.0;(3)6-BA 8.0及NAA 0.1,另加3.0%蔗糖,1.2%琼脂。生根培养基:1/2MS附加IBA 1.0,添加1.0%蔗糖和1.2%琼脂。培养基pH 5.8。水稻幼苗水培养液为木村B培养液。培养温度为25~28℃,愈伤组织诱导为暗培养,其它均为光照培养,光照度1 600 lx,光照时间16 h·d-1。4 生长与分化情况4.1 愈伤组织的诱导种子去外颖后,在超净工作台上,用70%的酒精浸泡1 min,再用5%的次酸钠消毒20 min,无菌水清洗3~4次后,将3种籼稻种子分别接种于愈伤组织诱导培养基(1)、(2)、(3)上。接种4 d后,种子在3种培养基上开始萌发,胚根、胚芽伸长;至10 d时,在一些胚的表面膨大,有愈伤组织形成。至21 d时,愈伤组织可增殖到5mm×5 mm大小,淡黄色,颗粒状,较干燥。愈伤组织形成率在3种培养基上存在明显差异,其中以(1)和(2)培养基上的愈伤组织形成率最高,可达70%~80%。rn4.2 芽的诱导将淡黄色的愈伤组织转移到芽诱导培养基上,暗中培养3 d之后转移到光照条件下培养,8 d左右便可观察到某些愈伤组织上有绿色的芽点形成,继续培养2周,芽陆续长成节间伸长的无根苗。愈伤组织在每种芽诱导培养基上都可分化芽。湖大5213的愈伤组织的芽分化频率随6-BA浓度的增加而降低,其最适的芽诱导培养基为(1)号芽诱导培养基,分化频率最高可达90%以上;而湖大118-2和湖大5216的愈伤组织则适宜在(2)号芽诱导培养基上培养,其分化频率最高可达80%~85%。对于在不同的愈伤组织诱导培养基上所形成的愈伤组织来说,其分化能力也有较大的差异,其中以(2)号愈伤组织诱导培养基上所形成的愈伤组织的分化能力最强。4.3 植株再生和室外栽培当无根苗长至4.0 cm左右,形成2~3片叶之后,便可将其转至生根培养基上诱导其生根。水稻苗生根较容易,7 d左右即可观察到有白色的根形成,以后平均每2 d即有一条新根形成,生根率可达100%。当小植株的根系发育形成后,取出小植株转到木村B培养液中培养1~2周,用塑料薄膜将其罩住,以便保湿。刚移出的小植株的叶片会因环境的变化而慢慢出现萎蔫现象,但4~5 d后会有新根和新的叶片形成。让小植株继续在培养液中培养14 d左右,即可移至土壤中栽培,移栽苗全部存活,生长状况良好。5 意义与进展籼稻是水稻一个重要亚种,占水稻品种80%以上。但由于不同基因型籼稻品种愈伤组织形成和植株再生能力方面差异较大,以至于籼稻品种转基因获得成功的较少。湖大118-2是杂交早籼稻恢复系,与马协A配组(马协118-2)于1999年通过了rn湖北省品种审定委员会的审定;湖大5216和湖大5213为湖北大学选育的早籼稻优质高产品系,分别为部颁一级米和部颁二级米.它们的植株再生系统尚未见报道。本文结果为今后对这些优质品种/品系的转基因研究奠定了基础,同时对其它籼稻品种植株再生系统的建立也可能有一定的参考价值。