【摘 要】
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目的:以硫氧还蛋白(Trx)为骨架,pBridge为载体,构建可诱导表达的酵母构象型随机10肽库.方法:利用PCR扩增出trx基因,向trx的突环区引入AscⅠ酶切位点,构建pBridge-mTrx重组载
【机 构】
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军事医学科学院基础医学研究所,军事医学科学院附属医院
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目的:以硫氧还蛋白(Trx)为骨架,pBridge为载体,构建可诱导表达的酵母构象型随机10肽库.方法:利用PCR扩增出trx基因,向trx的突环区引入AscⅠ酶切位点,构建pBridge-mTrx重组载体.采用(NNK)10的编码方式设计并合成两条寡核苷酸链,经退火、延伸,AscⅠ,RsrⅡ双酶切后,克隆至pBridge-mTrx载体,电转化E.coli DH10B感受态细胞.对所构建多肽文库的库容和随机性进行了鉴定,并利用Western印迹对文库的可诱导性进行分析.结果:获得库容量为8.7×108的随机肽库.随机挑选20个克隆进行测序,4个核苷酸的出现频率与理论值接近.在Met缺陷培养基中,随机肽库可被诱导表达.结论:成功构建可诱导表达的随机肽库,为进一步筛选特异性多肽奠定了基础.
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