【摘 要】
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目的:比较贴壁分离法和免疫磁珠法纯化小鼠精原干细胞(mSSCs)的优缺点.方法:分别选取10只12-15日龄的雄性C57BL/6小鼠,颈椎脱臼法处死,摘取睾丸用酶消化法获得曲细精管单细胞悬液,分别用贴壁分离法和免疫磁珠法从单细胞悬液中分离纯化mSSCs,并针对两种方法在细胞数量、分离效率以及对细胞增殖生长的影响等方面进行比较.结果:两种纯化方法均可从小鼠曲细精管单细胞悬液中分离纯化得到干细胞,并可在体外培养后呈现出典型的精原干细胞特有的葡萄串状克隆,体外连续培养增殖超3个月.10只小鼠的睾丸经差异贴壁法纯
【机 构】
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内蒙古医科大学基础医学院,呼和浩特010110;内蒙古医科大学心身医学研究室,呼和浩特010110
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目的:比较贴壁分离法和免疫磁珠法纯化小鼠精原干细胞(mSSCs)的优缺点.方法:分别选取10只12-15日龄的雄性C57BL/6小鼠,颈椎脱臼法处死,摘取睾丸用酶消化法获得曲细精管单细胞悬液,分别用贴壁分离法和免疫磁珠法从单细胞悬液中分离纯化mSSCs,并针对两种方法在细胞数量、分离效率以及对细胞增殖生长的影响等方面进行比较.结果:两种纯化方法均可从小鼠曲细精管单细胞悬液中分离纯化得到干细胞,并可在体外培养后呈现出典型的精原干细胞特有的葡萄串状克隆,体外连续培养增殖超3个月.10只小鼠的睾丸经差异贴壁法纯化后可以得到3×105±0.4×105个mSSCs(n=5),细胞回收率(纯化后细胞数/曲细精管单细胞悬液细胞数)为1.5％±0.1％(n=5);经免疫磁珠法可以得到6×105±0.4×105个mSSCs(n=5),细胞回收率为3.0％±0.1％(n=5),免疫磁珠法得到的干细胞数量更高.差异贴壁法得到的干细胞更纯,因为体外培养5 d左右即得到干细胞集落,而免疫磁珠法得到的干细胞则约10 d才可以看到明显的细胞集落,但是两种纯化方法对细胞体外长期增殖生长没有明显的影响.结论:两种方法均可以纯化得到高质量的mSSCs,,但两种方法各有优缺点.差异贴壁法较免疫磁珠法经济、实用,无需购买专门的设备和抗体磁珠,但获得的细胞数量相对较低,用时也较长.
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