【摘 要】
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目的 为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答,本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽(CD8+T细胞表位)及Ag85B,构建融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH),并对其免疫原性进行研究.方法 PCR分别扩增Ag85B、Mpt64190-198-HspX基因,并依次插入pET-28a质粒中,在大肠杆菌B
【机 构】
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730000,兰州大学结核病研究中心暨病理生理学研究所,730000,兰州大学结核病研究中心暨病原生物学研究所,730000,兰州大学结核病研究中心暨病理生理学研究所,730000,兰州大学结核病研究
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目的 为了建立对潜伏感染细菌的保护性免疫应答,本研究选择结核分枝杆菌休眠期、对数生长期最重要的保护性抗原HspX、Mpt64的190～198位的氨基酸多肽(CD8+T细胞表位)及Ag85B,构建融合蛋白Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH),并对其免疫原性进行研究.方法 PCR分别扩增Ag85B、Mpt64190-198-HspX基因,并依次插入pET-28a质粒中,在大肠杆菌BL21中表达纯化AMH蛋白.将该蛋白和佐剂二甲基三十六烷基铵和卡介苗多糖核酸(DDA+BCG-PSN)混合构建亚单位疫苗,分别于1、4、7周皮下免疫C57BL/6小鼠3次,最后一次免疫5周后检测体液免疫与细胞免疫反应.结果 该融合蛋白以包涵体形式能在大肠杆菌中稳定表达,经Ni-NTA层析柱纯化得到纯度较高的蛋白;构建的亚单位疫苗免疫动物能产生针对结核杆菌特定抗原(PPD、Ag85B、Mpt64190-198和HspX)的特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性.结论 融合蛋白AMH作为结核亚单位疫苗候选的融合蛋白抗原有必要进一步研究。
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