【摘 要】
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目的 探讨人退变髓核细胞(nucelus pulposus cells,NPCs)分泌的基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factorl,SDF-1)对血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)的
【机 构】
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西南医科大学附属中医院骨科 四川泸州646000;重庆医科大学附属第一医院骨科 重庆400042
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目的 探讨人退变髓核细胞(nucelus pulposus cells,NPCs)分泌的基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factorl,SDF-1)对血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)的增殖影响及其相关分子机制.方法 将术中摘取的椎间盘组织分离、培养人退变NPCs,取第1代转染SDF-1过表达慢病毒.取第2代细胞,转染或未转染过表达SDF-1慢病毒后,种植于alvetex(R)三维培养支架上行三维培养,并与人HMEC-1细胞(即VECs)共培养.共培养72 h扫描电镜观察NPCs在支架上的生长情况;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法分别检测12、24、48、72 h转染组与非转染组HMEC-1增殖情况,以及加入Akt特异性抑制剂GSK690693后24 hHMEC-1增殖情况;膜联蛋白V/碘化丙啶法分别检测共培养72 h后转染组和非转染组中VECs凋亡率;ELISA法分别检测转染组和非转染组培养基中VEGF含量;Western blot法检测转染组、未转染组和抑制剂组磷酸化Akt (p-Akt)和总Akt蛋白表达.结果 扫描电镜观察示NPCs在三维支架中维持了细胞表型,分泌大量细胞外基质;慢病毒成功转染后,Western blot检测示SDF-1在NPCs中表达明显升高.在共培养体系中,NPCs过表达SDF-1后可使HMEC-1增殖上升,凋亡率下降,并在细胞外培养基检测中发现VEGF含量显著上升;而在进一步分子机制检测中发现,SDF-1的过表达使HMEC-1中p-Akt水平升高,采用GSK690693特异性抑制Akt表达后,SDF-1对HMEC-1促细胞增殖作用明显降低.结论 人退变NPCs高表达的SDF-1有利于VECs增殖,这一调控机制或许与SDF-1-Akt信号通路有关.
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