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目的
通过3-羟基丁酸与3-羟基己酸的共聚酯膜(PHBHHx膜)与小鼠诱导多能干细胞(miPSCs)体外共培养,探讨其对miPSCs黏附、存活及分化的影响;寻找一种适合制作心肌补片的生物材料。
方法复苏miPSCs,传代后,将miPSCs与PHBHHx二维膜和PHBHHx三维膜共培养,72 h后行扫描电镜观察细胞黏附情况。用含和不含维生素C的分化培养基对其进行诱导分化,通过免疫荧光、流式细胞术测定心肌细胞特异性蛋白cTnT的含量。
结果miPSCs可以在PHBHHx膜上良好的黏附和存活。维生素C作为一种良好的体外诱导剂,可以极大地促进miPSCs向心肌细胞分化,诱导分化21天后免疫荧光测定心肌细胞特异性蛋白cTnT表达阳性;流式细胞术测定cTnT的表达量:加维生素C诱导剂组cTnT>未加任何诱导剂组[(47.54±1.46)%对(7.02±0.95)%,P<0.05]。在miPSCs和PHBHHx膜共培养向心肌细胞分化过程中,添加维生素C诱导剂时,cTnT的表达量PHBHHx三维膜细胞培养分化>PHBHHx二维膜细胞培养分化>传统的细胞培养皿培养[(60.32±1.76)%对(53.31±1.41)对(47.54±1.46)%,P<0.05]。
结论miPSCs与PHBHHx膜具有良好的组织相容性,可以在PHBHHx膜上黏附、存活和分化;相对于PHBHHx二维膜培养和传统的培养皿培养,三维PHBHHx膜培养在miPSCs向心肌细胞分化过程中具有更大的优势。