【摘 要】
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为探讨人源驱动蛋白MKLP1在有丝分裂和胞质分裂中的作用,以E.coli RNaseⅢ制备MKLP1的3'UTR esiRNA转染HeLa细胞,通过定量RT-PCR、Western印迹检测MKLP1 esiRNA对MKLP1基因的
【机 构】
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山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所,山东大学齐鲁医院胸外科,Burnham研究所
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为探讨人源驱动蛋白MKLP1在有丝分裂和胞质分裂中的作用,以E.coli RNaseⅢ制备MKLP1的3'UTR esiRNA转染HeLa细胞,通过定量RT-PCR、Western印迹检测MKLP1 esiRNA对MKLP1基因的沉默效率.再利用FACS分析、免疫荧光染色和活细胞成像分析检测MKLP1表达缺失后在有丝分裂和胞质分裂不同时期的细胞形态学、细胞分裂指数、细胞百分数,动态观察有丝分裂和胞质分裂期间的表型改变,以系统分析MKLP1的功能.最后通过挽救实验验证MKLP1esiRNA的作用特异性.实验显示MKLP1 esiRNA转染HeLa细胞能够有效地特异性消除MKLP1的表达,并被异位表达的MKLP1所挽救.MKLP1蛋白在有丝分裂后期和末期前期位于纺锤体中间带,在末期后期和胞质分裂的最后阶段集中于中间体的中心处.MKLP1表达缺失使中间体正确形成和胞质分裂的完成受到严重抑制,造成大量双/多核细胞堆积.结果表明,MKLP1在胞质分裂中间体形成和有丝分裂末期前期向后期过渡过程中起关键作用,是纺锤体中间体/中间带相关蛋白,为胞质分裂所必需.
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