【摘 要】
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目的 构建卫氏并殖吸虫成虫λZAP Ⅱ cDNA文库,使用卫氏并殖吸虫病患者混合血清筛选诊断候选抗原.方法 用卫氏并殖吸虫囊蚴感染实验犬,约70 d后取犬肺,收集卫氏并殖吸虫成虫,
【机 构】
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中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,国家热带病研究中心,世界卫生组织热带病合作中心,科技部国家级热带病国际联合研究中心,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,上海200025;永嘉县人民医院
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目的 构建卫氏并殖吸虫成虫λZAP Ⅱ cDNA文库,使用卫氏并殖吸虫病患者混合血清筛选诊断候选抗原.方法 用卫氏并殖吸虫囊蚴感染实验犬,约70 d后取犬肺,收集卫氏并殖吸虫成虫,提取虫体总RNA,经mRNA纯化试剂盒纯化后构建卫氏并殖吸虫成虫的λZAP Ⅱ cDNA文库.用卫氏并殖吸虫病患者混合血清筛选λZAP Ⅱ cDNA文库,获得阳性克隆,对插入片段测序并进行同源性分析. 结果 构建的卫氏并殖吸虫成虫λZAPⅡcDNA文库的滴度为5.2×105 pfu/ml,重组率为98.0％,文库插入片段平均长度为1.1kb.经免疫筛选获得Pw_Ⅰ、Pw_Ⅱ、Pw_Ⅲ和Pw_Ⅳ等4类阳性克隆.其代表克隆Pw1、Pw13、Pw18和Pw21的插入片段长度依次约为720、1 263、1 052、717 bp,均包含开放阅读框,顺序编码213、394、324和209个氨基酸,分别与卫氏并殖吸虫卵黄铁蛋白(yolk ferritin)基因、虫卵抗原(egg antigen)基因、前原组织蛋白酶L(pre-procathepsin L)基因和华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase)基因同源. 结论 成功构建了卫氏并殖吸虫成虫λZAP Ⅱ cDNA文库,筛选获得4类被卫氏并殖吸虫病患者血清特异性识别的阳性克隆,为进一步寻找卫氏并殖吸虫免疫诊断抗原奠定了基础.
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