【摘 要】
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鸡β防御素1在鸡防御系统中起重要作用,为实现其在真核细胞中的表达,本研究利用RT-PCR从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡p防御素1成熟肽基因,同时参照酵母密码子的偏好性,设计合成Gal
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鸡β防御素1在鸡防御系统中起重要作用,为实现其在真核细胞中的表达,本研究利用RT-PCR从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡p防御素1成熟肽基因,同时参照酵母密码子的偏好性,设计合成Gal-1成熟肽片段新基因,并在其3’ 端添加6 x His序列以检测鸡β防御素1的表达情况,分别构建分泌型表达载体pPIC9K-GaI-1和pPIC9K-Gal-1-a-His,线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115,G418抗性筛选高拷贝转化子,阳性克隆用甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析和Western-blotting鉴定表达上清液.结果表明,从狼山鸡法氏囊中扩增出鸡β防御素1成熟肽基因,其序列与GenBank登录号AF033335的序列同源性为100％;Gal-1和Gal-1-a-His基因均成功整合到毕赤酵母基因组中,重组酵母蛋白Gal-1-His获得了成功表达.本研究为后续鸡β防御素1的高效表达和生物学活性研究奠定了基础.
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