【摘 要】
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目的:探索进一步提高 HIV-1 p24 gag 蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段.方法:通过改造原核表达载体 pBV220和 pET28,构建了一种新的通用型温控原核表达载体 pV
【机 构】
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长春农牧大学基因工程实验室,长春,130062;解放军海军总医院,北京,100037;白求恩医科大学地方病研究所,长春,130021
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目的:探索进一步提高 HIV-1 p24 gag 蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段.方法:通过改造原核表达载体 pBV220和 pET28,构建了一种新的通用型温控原核表达载体 pVV5,将 HIV-1 gag 基因的 1 148～1 857 编码序列,插入到 pVV5b 和 pET28b 的相应位点中,构建了重组表达质粒 pEG1b 和 pEG7b,转化到大肠杆菌中进行表达,产物利用 IMAC 金属螯合层析柱进行纯化,纯化的表达产物用 HIV-1 标准阳性血清进行鉴定.结果:构建的重组表达质粒 pEG1b 和 pEG7b 在相应受体菌中表达重组蛋白的量为41%和28%,表达的外源蛋白经 IMAC 柱一步纯化后纯度超过80%,纯化后的重组蛋白可与 HIV-1 阳性血清发生 ELISA 反应.结论:构建的通用型温控原核表达载体可以高效地表达外源蛋白,在大肠杆菌中高效地表达 HIV-1 p24 可用于制备 HIV-1 感染的诊断试剂.
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