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摘 要 大麻是雌雄異株的异花授粉作物，在苗期鉴定出植株的性别，对大麻育种及生产具有重要的意义。为开发与籽用大麻品种性别连锁的SCAR标记，本研究以汾麻3号、榆社麻和苍山麻为试验材料，研究已有的11个性别连锁标记在籽用大麻品种中的适用性。结果表明，3个标记（OPD-05、UBC-354和MADC2）在籽用大麻品种中呈雄性特异，尚未发现雌性特异条带。回收雄性特异条带并测序，根据测序结果新开发了6个SCAR标记，其中MADC2-8表现最好;进而利用123份已知性别的样本来检测MADC2-8的准确性，发现其平均准确性高达98.34%。该研究不仅丰富了大麻性别鉴定的分子标记，而且为大麻性别研究和实际应用奠定基础。
关键词 大麻;籽用品种;性染色体;SCAR;MADC中图分类号 S563.3 文献标识码 A
Evaluation of Markers Linked to Sex-specific and Development of SCAR Makers in Seed Hemp （Cannabis sativa L.）
ZHAO Mingsen1，2， FANG Shusheng2，3*， CHEN Yao2，3， KANG Hongmei1， GAO Jinhu1， CHEN Siyuan2，3， YANG Xin2，3， FENG Xuping1， ZHANG Liwu2，3**
1. Institute of Economic Crops， Shanxi Academy of Agricultural Sciences， Taiyuan， Shanxi 030000， China; 2. Key Laboratory for Genetics， Breeding and Multiple Utilization of Crops， Ministry of Education / Fujian Key Laboratory for Crop Breeding by Design， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002， China; 3. Experiment Station of Jute and Kenaf in Southeast China， Ministry of Agriculture and Rural Affairs / Public Platform for Germplasm Resources of Bast Fiber Crops of Fujian， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002， China
Abstract Hemp （Cannabis sativa L.） is a dioecious and cross pollinated plant. Sex identification of plants at seedling stage is of great significance for breeding and production in hemp. To develop new SCAR markers linked to sex-specific， three Chinese local seed hemp varieties， Fenma No.3， Yushema and Cangshanma， were used as the experimental materials to investigate the application of 11 markers linked to sex-specific in Chinese local seed hemp varieties in this study. The results showed that three makers （OPD-05 and UBC-354 as well as MADC2） were male-specific， while no female specific bands were found. Novel SCAR markers were developed on the basis of sequences of male specific bands. Among them， MADC2-8 was the best. Furthermore， 123 samples with known sex identification were used to assess the accuracy of MADC2-8. The average accuracy was 98.34%. These results would not only enrich the molecular markers linked to sex-specific， but also lay a foundation for the research and practical application of sex identification in hemp. Keywords Cannabis sativa; seed variety; sex chromosome; SCAR; MADC
DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.10.023
大麻（Cannabis sativa L.）为大麻科（Cannabinaceae）大麻属（Cannabis L.），属短日照异花授粉作物，雌雄异株[1]。按栽培目的进行分类，大麻可分为纤用型（工业大麻）、籽用型（油用型）、药用型等。籽用型品种籽产量高，含油可达32%以上;纤用型品种麻皮产量高，出麻率高，纤维柔软、色白、有光泽;药用型品种花叶产量高，大麻二酚含量高[1-4]。大麻植株有雌株及雄株不同类型，不同性别的植株形态存在较大差异。大麻从种子萌发到开花一般需要3个月以上的时间，在此之前不能从形态上准确判断植株性别[5]，只有在开花时才能从形态上准确判断植株性别，生产上通常采用多留苗，到时雄性植株开花后自然死亡，这样造成极大的浪费。因此，在苗期鉴定出植株的性别，对大麻育种及栽培均具有重要的意义。利用分子标记技术能够克服形态和生理生化指标受环境及发育阶段影响的缺点，从分子水平上在苗期鉴定出植株的性别。
关于大麻性别，前人早在20世纪初就展开了研究。Hirata等[6]发现大麻是有2个异型性染色体的雌雄异型植株，Yamada等[7]指出大麻雌株有2个X染色体，雄株有1个X染色体和1个Y染色体。Warmke等[8]研究表明，常染色体并不参与大麻性别表达，其性别表达差异与X、Y染色体上分别携带雌性和雄性表达的基因有关。大麻的核型是由9对常染色体和1对性染色体（X和Y）[9-10]，其性别表达是由Y染色体控制[11-12]。而同大麻亲缘关系最近的啤酒花（Humulus lupulus）性别却受X染色体与常染色体比值影响 [13-14]。在其他物种中如黄瓜，其性别性状可以由一个大片段DNA序列拷贝数决定[15]，而在大麻中将转座子和序列拷贝数与表型性状相关联仍然是个挑战[16]。但有研究显示，大麻性别分化跟反转座子存在着相关性[17-18]。Faux等[19]首次整合了雌雄异株和雌雄同株的连锁图谱，并进行了QTL分析，将雌雄同株性别基因定位到X染色体上。鉴于大麻植株性别鉴定的经济效益，前人还开发出性别特异的分子标记用于雌雄单株的早期鉴定，如Saka m oto[20]、Mandolino[21]利用RAPD技术分别开发出雄性特异SCAR标记MADC1（730 bp）、MADC2（390 bp）;T?rjék等[22]也开发出雄性特异标记MADC5（323 bp）和MADC6（119 bp）。宋书娟等[23]和Shao等[24]分别用RAPD引物OPX09、OPA04和OPF05得出雌性特异的带型。尽管前人开发了一些性别连锁的标记，但是这些研究主要集中在纤用和药用大麻，是否适用于籽用大麻品种还属未知。
本研究以籽用大麻为材料，验证已有的性别连锁标记在籽用大麻的适用性，并开发SCAR标记。
1.1 材料
2018年2月1日在福建省三明市福建农林大学洋中科教基地玻璃温室内分2个小区种植榆社麻和汾麻3号，钢架大棚中种植榆社麻，每个品种随机挑选100株苗编号挂牌，取幼嫩叶片于10 mL离心管中，保存于–80 ℃冰箱备用;待其开花后，记录编号单株性别并统计其品种的雌雄单株总数。
1.2 方法
1.2.1 DNA提取 利用改良CTAB法提取基因组DNA[25]，1.2%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，紫外分光光度计测定其浓度并统一稀释为50 ng/L，作为模版保存于-20 ℃备用。
1.2.2 引物选择及PCR扩增 选用前人文献中性别鉴定相关引物[20-22， 24]，送至福州擎科生物科技有限公司合成。利用榆社麻和汾麻3号两个品种的雌雄单株各5个作为模版，进行PCR扩增。RAPD引物PCR反应体系为10 μL，含2?Taq Master Mix（试剂购自上海进岸生物科技有限公司）3.8 μL、ddH2O 3.8 μL、10 μmol/L引物0.4 μL，DNA模版2 μL;SCAR引物PCR反应体系10 μL，含2?Taq Master mix 3.8 μL、ddH2O 3.8 μL、10 μmol/L引物對左右各0.2 μL，DNA模版2 μL。 1.2.3 PCR扩增产物的回收、克隆和测序 将胶块中性别特异DNA片段从琼脂糖凝胶上切割下来，用通用型DNA纯化回收试剂盒（Universal DNA Purification Kit，TIANGEN，# DP214-03）进行回收，将用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带的样品，送到博尚生物技术有限公司进行测序。
1.2.4 SCAR标记开发、验证和应用 针对性别特异的序列，利用Primer Premier 5设计引物，由福州擎科生物科技有限公司合成。利用榆社麻和汾麻3号两个品种雌雄株各3个作为模版，验证并挑出有效的引物;选用小样本，即汾麻3号雌雄单株各4株，榆社麻雄单株5株、雌单株6株作为模版，初步验证前人标记及与新开发标记的有效性。進而，扩大样本量，利用不同遗传背景且已知性别表型的123个单株，进一步检测标记的准确性。
2.1 大麻性别分离群体遗传分析
在大麻开花后，统计其雌雄单株数，如表1所示。玻璃温室中，汾麻3号雌雄比值为1.34，c2值为11.12，与理论比差异极显著;而榆社麻雌雄比值为1.14，c2值为2.59，与理论比差异不显著;钢架大棚中，榆社麻雌雄比值为1.17，c2值
为9.50，与理论比差异显著，榆社麻总雌雄单株数比值为1.16，c2值为9.50，与理论比差异极显著。不同籽用大麻品种在不同种植环境下，其性别分化雌雄比值偏离1∶1。
2.2 大麻性别连锁标记验证及多态性片段克隆
整合前人研究中的性别连锁标记，如表2所示，包括7个RAPD标记，4个SCAR标记（MADC1、MADC2、SCAR119和SCAR323）。随机选取汾麻3号和榆社麻雌雄单株各5份，以基因组DNA作为模版，进行PCR扩增。11个标记中，只有OPD-05、UBC-354和MADC2等3个标记能在籽用大麻扩增出雄性特异条带，如图1和图2所示。表明前人开发的大麻性别连锁标记并不都是适合中国地方籽用品种。有必要进一步开发出与适合地方籽用大麻品种的性别连锁标记。
2.3 大麻性别连锁SCAR标记开发
根据特异条带的测序结果，设计了60对引物，取汾麻3号和榆社麻雌雄单株各3份，以其叶片总DNA为模版，验证所设计引物，结果得出6对有效引物，与性别连锁。根据条带清晰度，划分三级，如表3所示。该6对引物在雄性单株中都有2条带，雌性单株中有1条带，其中引物MADC2-8和MADC2-9带型最为明显，其次是MADC2-6和MADC3-5，其余引物带型较弱（图3）。
2.4 开发引物的比较验证与应用
新开发的6对引物中，MADC2-8带型最清晰。利用相同的模板，与MADC2标记进行比较，如图4所示。MADC2中雄单株条带亮而清晰，但雌单株条带呈1条或2条较暗带;而MADC2-8中雄单株呈2条亮带，雌单株呈1条亮带。表明MADC2-8优于MADC2。
为了进一步评估MADC2-8在不同遗传背景材料中的扩增情况，选用来自汾麻3号、榆社麻及苍山麻共123个已知性别的单株进行验证（表4）。结果显示，除了在汾麻3号中有2个雄性样品未扩增出条带，其余样品均有条带且检测准确率100%，平均准确率98.34%。表明MADC2-8在不同背景材料中用于雄性特异的检测。
大麻雌雄异株性别的表达，一方面受基因控制，另一方面受环境因子的调控。大麻性别与环境之间的相互关系为建立全雌品系和全雄品系提供可能。然而，在自然状态下大麻性别只能通过生殖器官形态来判断[5]，给品系的筛选带来了不便，而建立与性别连锁的标记可有效弥补这个缺陷。前人利用RAPD和AFLP技术寻找到10多条雄性特异条带[9， 21-22， 26-31]和3条雌性特异条带[27-28]，并将其转化为更加稳定的SCAR标记[20-22， 27， 30]。
本研究中选用的材料为中国地方品种，具有地域性，故前人研究在本试验材料中不一定完全适用，开展适应于地方品种的研究就具有实际意义。本研究用汾麻3号和榆社麻两个品种，对大麻性别分离群体进行探究，发现3个群体中雌雄比都大于1，即雌单株多于雄单株，且随着榆社麻群体的扩大，其分离比与理论值差异达到极显著。综上可知，该批试验材料性别分离并不完全符合1∶1分离比例。这可能是由于栽培环境的影响[1]，也有类似的文献提及材料种植在冬季大棚中，存在雄花转化为雌花的现象[5]。其具体原因可能涉及到表观遗传学的一种或几种机制，例如DNA甲基化、非编码RNA调控等，还需进一步的深入研究。
在大麻性别鉴定方面，本研究整合验证前人选用的RAPD标记及SCAR标记，发现RAPD标记中有OPD-05和UBC-354呈现雄性特异，而SCAR标记只有MADC2有雄性特异带型。但MADC2标记在扩大实验材料规模后的检测中，不如新开发的SCAR标记MADC2-8效果好，这表明本研究新开发的性别连锁SCAR标记可以有效鉴定不同类型大麻的性别。综上说明，OPD-05、UBC-354 和MADC2等标记在探究大麻雄性特异标记有很好的参考价值。由于前人研究所用试验材料多为欧洲品种，而本试验材料为中国地方品种，遗传背景不同;另外，工业大麻与籽用大麻在形态上存在明显差异。这些导致了前人开发的标记在中国本地品种中不一定完全适用，因此开发适应本试验材料的分子标记很有必要。 虽然本研究开发的标记与雄性高度连锁，但试验材料选用的品种还是较少，下一步有必要扩大品种数及品种类型，验证新开发的性别连锁标记是否具有广泛适用性。在验证前人开发的分子标记中，并未发现雌性特异的条带。因此，在本研究的基础上，有必要通过集团分离分析法结合测序技术对大麻群体进行分析，进一步开发雌性特异分子标记甚至雌雄同株特异标记，进而利用多重PCR反应[32]快速鉴定出大麻三种性别。
本研究验证了3个性别连锁标记适用于中国地方籽用大麻品种，并新开发出6个雄性特异SCAR标记，其中，MADC2-8在中国地方籽用大麻品种中准确率高达98.34%。这些标记可用于籽用大麻早期性别田间鉴定。
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ZHAO Mingsen1，2， FANG Shusheng2，3*， CHEN Yao2，3， KANG Hongmei1， GAO Jinhu1， CHEN Siyuan2，3， YANG Xin2，3， FENG Xuping1， ZHANG Liwu2，3**
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Abstract Hemp （Cannabis sativa L.） is a dioecious and cross pollinated plant. Sex identification of plants at seedling stage is of great significance for breeding and production in hemp. To develop new SCAR markers linked to sex-specific， three Chinese local seed hemp varieties， Fenma No.3， Yushema and Cangshanma， were used as the experimental materials to investigate the application of 11 markers linked to sex-specific in Chinese local seed hemp varieties in this study. The results showed that three makers （OPD-05 and UBC-354 as well as MADC2） were male-specific， while no female specific bands were found. Novel SCAR markers were developed on the basis of sequences of male specific bands. Among them， MADC2-8 was the best. Furthermore， 123 samples with known sex identification were used to assess the accuracy of MADC2-8. The average accuracy was 98.34%. These results would not only enrich the molecular markers linked to sex-specific， but also lay a foundation for the research and practical application of sex identification in hemp. Keywords Cannabis sativa; seed variety; sex chromosome; SCAR; MADC
DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.10.023
大麻（Cannabis sativa L.）为大麻科（Cannabinaceae）大麻属（Cannabis L.），属短日照异花授粉作物，雌雄异株[1]。按栽培目的进行分类，大麻可分为纤用型（工业大麻）、籽用型（油用型）、药用型等。籽用型品种籽产量高，含油可达32%以上;纤用型品种麻皮产量高，出麻率高，纤维柔软、色白、有光泽;药用型品种花叶产量高，大麻二酚含量高[1-4]。大麻植株有雌株及雄株不同类型，不同性别的植株形态存在较大差异。大麻从种子萌发到开花一般需要3个月以上的时间，在此之前不能从形态上准确判断植株性别[5]，只有在开花时才能从形态上准确判断植株性别，生产上通常采用多留苗，到时雄性植株开花后自然死亡，这样造成极大的浪费。因此，在苗期鉴定出植株的性别，对大麻育种及栽培均具有重要的意义。利用分子标记技术能够克服形态和生理生化指标受环境及发育阶段影响的缺点，从分子水平上在苗期鉴定出植株的性别。
关于大麻性别，前人早在20世纪初就展开了研究。Hirata等[6]发现大麻是有2个异型性染色体的雌雄异型植株，Yamada等[7]指出大麻雌株有2个X染色体，雄株有1个X染色体和1个Y染色体。Warmke等[8]研究表明，常染色体并不参与大麻性别表达，其性别表达差异与X、Y染色体上分别携带雌性和雄性表达的基因有关。大麻的核型是由9对常染色体和1对性染色体（X和Y）[9-10]，其性别表达是由Y染色体控制[11-12]。而同大麻亲缘关系最近的啤酒花（Humulus lupulus）性别却受X染色体与常染色体比值影响 [13-14]。在其他物种中如黄瓜，其性别性状可以由一个大片段DNA序列拷贝数决定[15]，而在大麻中将转座子和序列拷贝数与表型性状相关联仍然是个挑战[16]。但有研究显示，大麻性别分化跟反转座子存在着相关性[17-18]。Faux等[19]首次整合了雌雄异株和雌雄同株的连锁图谱，并进行了QTL分析，将雌雄同株性别基因定位到X染色体上。鉴于大麻植株性别鉴定的经济效益，前人还开发出性别特异的分子标记用于雌雄单株的早期鉴定，如Saka m oto[20]、Mandolino[21]利用RAPD技术分别开发出雄性特异SCAR标记MADC1（730 bp）、MADC2（390 bp）;T?rjék等[22]也开发出雄性特异标记MADC5（323 bp）和MADC6（119 bp）。宋书娟等[23]和Shao等[24]分别用RAPD引物OPX09、OPA04和OPF05得出雌性特异的带型。尽管前人开发了一些性别连锁的标记，但是这些研究主要集中在纤用和药用大麻，是否适用于籽用大麻品种还属未知。
本研究以籽用大麻为材料，验证已有的性别连锁标记在籽用大麻的适用性，并开发SCAR标记。
1 材料与方法
1.1 材料
2018年2月1日在福建省三明市福建农林大学洋中科教基地玻璃温室内分2个小区种植榆社麻和汾麻3号，钢架大棚中种植榆社麻，每个品种随机挑选100株苗编号挂牌，取幼嫩叶片于10 mL离心管中，保存于–80 ℃冰箱备用;待其开花后，记录编号单株性别并统计其品种的雌雄单株总数。
1.2 方法
1.2.1 DNA提取 利用改良CTAB法提取基因组DNA[25]，1.2%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，紫外分光光度计测定其浓度并统一稀释为50 ng/L，作为模版保存于-20 ℃备用。
1.2.2 引物选择及PCR扩增 选用前人文献中性别鉴定相关引物[20-22， 24]，送至福州擎科生物科技有限公司合成。利用榆社麻和汾麻3号两个品种的雌雄单株各5个作为模版，进行PCR扩增。RAPD引物PCR反应体系为10 μL，含2?Taq Master Mix（试剂购自上海进岸生物科技有限公司）3.8 μL、ddH2O 3.8 μL、10 μmol/L引物0.4 μL，DNA模版2 μL;SCAR引物PCR反应体系10 μL，含2?Taq Master mix 3.8 μL、ddH2O 3.8 μL、10 μmol/L引物對左右各0.2 μL，DNA模版2 μL。 1.2.3 PCR扩增产物的回收、克隆和测序 将胶块中性别特异DNA片段从琼脂糖凝胶上切割下来，用通用型DNA纯化回收试剂盒（Universal DNA Purification Kit，TIANGEN，# DP214-03）进行回收，将用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带的样品，送到博尚生物技术有限公司进行测序。
1.2.4 SCAR标记开发、验证和应用 针对性别特异的序列，利用Primer Premier 5设计引物，由福州擎科生物科技有限公司合成。利用榆社麻和汾麻3号两个品种雌雄株各3个作为模版，验证并挑出有效的引物;选用小样本，即汾麻3号雌雄单株各4株，榆社麻雄单株5株、雌单株6株作为模版，初步验证前人标记及与新开发标记的有效性。進而，扩大样本量，利用不同遗传背景且已知性别表型的123个单株，进一步检测标记的准确性。
2 结果与分析
2.1 大麻性别分离群体遗传分析
在大麻开花后，统计其雌雄单株数，如表1所示。玻璃温室中，汾麻3号雌雄比值为1.34，c2值为11.12，与理论比差异极显著;而榆社麻雌雄比值为1.14，c2值为2.59，与理论比差异不显著;钢架大棚中，榆社麻雌雄比值为1.17，c2值
为9.50，与理论比差异显著，榆社麻总雌雄单株数比值为1.16，c2值为9.50，与理论比差异极显著。不同籽用大麻品种在不同种植环境下，其性别分化雌雄比值偏离1∶1。
2.2 大麻性别连锁标记验证及多态性片段克隆
整合前人研究中的性别连锁标记，如表2所示，包括7个RAPD标记，4个SCAR标记（MADC1、MADC2、SCAR119和SCAR323）。随机选取汾麻3号和榆社麻雌雄单株各5份，以基因组DNA作为模版，进行PCR扩增。11个标记中，只有OPD-05、UBC-354和MADC2等3个标记能在籽用大麻扩增出雄性特异条带，如图1和图2所示。表明前人开发的大麻性别连锁标记并不都是适合中国地方籽用品种。有必要进一步开发出与适合地方籽用大麻品种的性别连锁标记。
2.3 大麻性别连锁SCAR标记开发
根据特异条带的测序结果，设计了60对引物，取汾麻3号和榆社麻雌雄单株各3份，以其叶片总DNA为模版，验证所设计引物，结果得出6对有效引物，与性别连锁。根据条带清晰度，划分三级，如表3所示。该6对引物在雄性单株中都有2条带，雌性单株中有1条带，其中引物MADC2-8和MADC2-9带型最为明显，其次是MADC2-6和MADC3-5，其余引物带型较弱（图3）。
2.4 开发引物的比较验证与应用
新开发的6对引物中，MADC2-8带型最清晰。利用相同的模板，与MADC2标记进行比较，如图4所示。MADC2中雄单株条带亮而清晰，但雌单株条带呈1条或2条较暗带;而MADC2-8中雄单株呈2条亮带，雌单株呈1条亮带。表明MADC2-8优于MADC2。
为了进一步评估MADC2-8在不同遗传背景材料中的扩增情况，选用来自汾麻3号、榆社麻及苍山麻共123个已知性别的单株进行验证（表4）。结果显示，除了在汾麻3号中有2个雄性样品未扩增出条带，其余样品均有条带且检测准确率100%，平均准确率98.34%。表明MADC2-8在不同背景材料中用于雄性特异的检测。
3 讨论
大麻雌雄异株性别的表达，一方面受基因控制，另一方面受环境因子的调控。大麻性别与环境之间的相互关系为建立全雌品系和全雄品系提供可能。然而，在自然状态下大麻性别只能通过生殖器官形态来判断[5]，给品系的筛选带来了不便，而建立与性别连锁的标记可有效弥补这个缺陷。前人利用RAPD和AFLP技术寻找到10多条雄性特异条带[9， 21-22， 26-31]和3条雌性特异条带[27-28]，并将其转化为更加稳定的SCAR标记[20-22， 27， 30]。
本研究中选用的材料为中国地方品种，具有地域性，故前人研究在本试验材料中不一定完全适用，开展适应于地方品种的研究就具有实际意义。本研究用汾麻3号和榆社麻两个品种，对大麻性别分离群体进行探究，发现3个群体中雌雄比都大于1，即雌单株多于雄单株，且随着榆社麻群体的扩大，其分离比与理论值差异达到极显著。综上可知，该批试验材料性别分离并不完全符合1∶1分离比例。这可能是由于栽培环境的影响[1]，也有类似的文献提及材料种植在冬季大棚中，存在雄花转化为雌花的现象[5]。其具体原因可能涉及到表观遗传学的一种或几种机制，例如DNA甲基化、非编码RNA调控等，还需进一步的深入研究。
在大麻性别鉴定方面，本研究整合验证前人选用的RAPD标记及SCAR标记，发现RAPD标记中有OPD-05和UBC-354呈现雄性特异，而SCAR标记只有MADC2有雄性特异带型。但MADC2标记在扩大实验材料规模后的检测中，不如新开发的SCAR标记MADC2-8效果好，这表明本研究新开发的性别连锁SCAR标记可以有效鉴定不同类型大麻的性别。综上说明，OPD-05、UBC-354 和MADC2等标记在探究大麻雄性特异标记有很好的参考价值。由于前人研究所用试验材料多为欧洲品种，而本试验材料为中国地方品种，遗传背景不同;另外，工业大麻与籽用大麻在形态上存在明显差异。这些导致了前人开发的标记在中国本地品种中不一定完全适用，因此开发适应本试验材料的分子标记很有必要。 虽然本研究开发的标记与雄性高度连锁，但试验材料选用的品种还是较少，下一步有必要扩大品种数及品种类型，验证新开发的性别连锁标记是否具有广泛适用性。在验证前人开发的分子标记中，并未发现雌性特异的条带。因此，在本研究的基础上，有必要通过集团分离分析法结合测序技术对大麻群体进行分析，进一步开发雌性特异分子标记甚至雌雄同株特异标记，进而利用多重PCR反应[32]快速鉴定出大麻三种性别。
4 结论
本研究验证了3个性别连锁标记适用于中国地方籽用大麻品种，并新开发出6个雄性特异SCAR标记，其中，MADC2-8在中国地方籽用大麻品种中准确率高达98.34%。这些标记可用于籽用大麻早期性别田间鉴定。
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