【摘 要】
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杧果露水斑病和细菌性黑斑病在国内杧果产区普遍发生,严重威胁杧果安全生产,俗称柁果“两病”.建立准确高效的检测方法,提早检出杧果两病并及时采取防治措施,可有效减轻为害.
【机 构】
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海南大学热带农林学院,海南大学热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室,海口,570228;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室,海口,571101
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杧果露水斑病和细菌性黑斑病在国内杧果产区普遍发生,严重威胁杧果安全生产,俗称柁果“两病”.建立准确高效的检测方法,提早检出杧果两病并及时采取防治措施,可有效减轻为害.本实验通过筛选反应体系和电泳条件,建立了可同时检测杧果中的露水斑病菌和细菌性黑斑病菌的双重PCR检测体系.结果表明:25 μL反应体系,2×Taq PCR MasterMix 12.5 μL,引物ML-SF9/SR5 (10 μmol/L)各1.5 μL、XcmHF/HR(10 μmol/L)各1μL,模板各1μL,加ddH2O补足至25 μL.反应条件为94℃预变性4 min;94℃变性45 s,65℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸5 min.电泳检测条件为1.5％琼脂糖凝胶浓度、120 V电压电泳25 min.该体系检测下限为杧果露水斑病原菌gDNA 0.224 ng/μL、细菌性黑斑菌液2.6×104 cfu/mL.该技术可应用于田间杧果“两病”的早期检测与鉴定工作中.
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