【摘 要】
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目的探讨聚合酶链反应快速检出血培养物中的伤寒杆菌,用于伤寒杆菌菌血症的诊断. 方法根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因DNA核苷酸序列设计特异性寡核苷酸引物,应用聚合酶链反应技术
【机 构】
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第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,710033
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目的探讨聚合酶链反应快速检出血培养物中的伤寒杆菌,用于伤寒杆菌菌血症的诊断. 方法根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因DNA核苷酸序列设计特异性寡核苷酸引物,应用聚合酶链反应技术快速检出血培养物中的伤寒杆菌. 结果对伤寒杆菌和7株非伤寒杆菌,同时进行PCR扩增,结果只有伤寒杆菌出现458 bp的特异性扩增区带,其他7株非伤寒杆菌均未出现458 bp的扩增区带. 有关引物的敏感性,经对倍比稀释的伤寒杆菌菌悬液进行扩增,结果表明,在100个菌细胞时即可扩增出明显的458 bp的区带. 应用所建立的PCR方法,对10份模拟血培养中的伤寒杆菌进行检测,已确定PCR鉴定伤寒杆菌的最佳鉴定时机,在第6小时检测出的阳性结果可达80%,8 h以后的阳性结果就可达100%;对18例发热患者血液用常规细菌增菌培养、分离鉴定与PCR法同时检测,结果分离鉴定法有5例被证实为伤寒杆菌感染;有6例被PCR扩增出特异性区带,在检出时间上PCR法(8 h)明显早于细菌分离鉴定法(48 h). 结论以伤寒杆菌鞭毛抗原基因DNA核苷酸序列设计特异性寡核苷酸引物,用于血培养物中伤寒杆菌的快速检出,为伤寒的临床早期诊断及时治疗提供诊断依据.
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