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目的
观察重组人骨形态形成蛋白–2(rhBMP–2)/壳聚糖微球对间充质干细胞的影响和rhBMP–2的体外释放特征。
方法利用乳化交联法来制备包载rhBMP–2的壳聚糖微球，用电镜观察微球的形态。以微球浸提液为实验组，以空白培养基为对照组来培养人间充质干细胞，以检测微球的细胞毒性和对细胞增殖的影响。用动态浸泡的方法来检测rhBMP–2的体外释放特征。通过比较缓释3、7 d获取的微球缓释液与空白培养基对细胞血清碱性磷酸酶(ALP)表达的影响，来反应缓释的rhBMP–2是否具有生物活性。
结果所制备的壳聚糖微球呈球状。将微球浸提液与人间充质干细胞培养24、48 h，两个时间点实验组与对照组A值差异无统计学意义[24 h：(0.72±0.07)比(0.73±0.05)，P>0.05；48 h：(1.19±0.11)比(1.27±0.06)，P>0.05]。将浸提液与细胞培养1、3、7 d，实验组和对照组细胞数量均逐渐增多，且每个时间点实验组与对照组A值差异无统计学意义。5 mg微球在体外释放19 d，rhBMP–2逐渐释放，第19天检测浓度仍达到(216.1±20.0) ng/ml。缓释3 d与7 d组间充质干细胞ALP活性分别为：(0.50±0.07)、(0.68±0.06) μmol pNPP·min–1·mg–1蛋白，均显著高于空白培养基组(0.14±0.01, P<0.05)。
结论用香草醛为交联剂制备的rhBMP–2微球具有良好的生物相容性，能够缓释rhBMP–2，且在制备过程中仍能保持rhBMP–2的生物活性。