【摘 要】
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目的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)因其良好的生物安全性和生物相容性,以及具有细胞识别及黏附位点等优势而广泛用作组织工程支架材料。探讨神经来源天然ECM的制备方
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2009AA03Z312);全军医药卫生科研基金资助项目(06Z057);国家科技支撑计划资助项目(2009BAI87B02)~~
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目的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)因其良好的生物安全性和生物相容性,以及具有细胞识别及黏附位点等优势而广泛用作组织工程支架材料。探讨神经来源天然ECM的制备方法及用于神经组织工程支架的可行性。方法收集新鲜犬坐骨神经10根,采用低渗冻融、机械粉碎、差速离心法制备神经ECM。采用扫描电镜观察其形态特征;Ⅰ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白免疫荧光染色观察其组成成分,并用Hoechst33258荧光染色检测其去细胞程度;行天狼猩红、番红O、甲苯胺蓝染色,对其成分进行定性分析;采用生化定量检测神经ECM中总胶原和葡萄糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)的含量;将大鼠背根神经节和大鼠雪旺细胞分别与神经ECM膜共培养,采用免疫荧光染色观察神经组织以及细胞在ECM膜上的生物相容性。结果扫描电镜观察示神经ECM为直径30~130nm的二维纳米微丝。免疫荧光染色示Ⅰ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白染色均呈阳性;Hoechst33258荧光染色提示神经ECM去细胞完全。组织化学染色示天狼猩红、番红O、甲苯胺蓝染色均呈阳性。生化成分定量检测神经ECM总胶原含量为(114.88±13.33)μg/mg干重,与正常神经组织的(54.07±5.06)μg/mg干重比较,差异有统计学意义(P<0.01);神经ECM的GAG含量为(17.52±2.34)μg/mg干重,与正常神经组织的(25.25±1.56)μg/mg干重比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠背根神经节培养7d后,可见神经丝蛋白200免疫荧光染色呈阳性;大鼠雪旺细胞培养2d后,可见S100免疫荧光染色呈阳性。结论神经ECM富含Ⅰ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白等成分,具有良好的细胞相容性,可作为一种理想的神经组织工程支架材料。
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