论文部分内容阅读
血浆中血管内皮细胞生长因子(VEGF)浓度的升高以及足细胞上瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)的过度表达都和肾脏疾病的蛋白尿有关，因此，本实验重点研究了VEGF是否能调节足细胞上TRPC6的表达。研究使用VEGF165处理培养的足细胞，分别用定量RT-PCR逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法来分析TRPC6 mRNA和蛋白的表达。共聚焦显微镜分析用黄色荧光蛋白标记的足细胞上的TRPC6。TRPC6相关的钙离子内流用荧光定量的方法来分析。糖尿病肾病组和对照组肾脏组织免疫荧光和免疫组化分析结果表明，使用VEGF165处理培养的足细胞后能够显著增加TRPC6 mRNA的表达和蛋白水平，并且VEGF165的这种作用具有剂量依赖性，而且，磷酸次黄苷酸3-激酶抑制剂能够阻断VEGF的这种作用。当一种蛋白质生物合成的阻滞剂，环己酰亚胺存在时，没有观察到VEGF对TRPC6蛋白表达水平的促进作用，这表明VEGF对TRPC6的这种作用需要从蛋白合成开始。VEGF165显著增加了足细胞中TRPC6媒介的钙内流。使用RNA干扰技术敲除TRPC6基因后，足细胞中的钙内流显著降低。免疫组化结果显示：和对照组相比，糖尿病肾病患者足细胞上的TRPC6通道蛋白和2型VEGF受体蛋白(VEGFR-2)都有所增加。在人的肾皮质中VEGFR-2 mRNA 和 TRPC6 mRNA显著相关(n=48; r2=0.585; P <0.001)。研究结果提示VEGF可以调控足细胞上的TRPC6。