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目的
观察大鼠大脑皮质神经元细胞缺氧时促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)及其mRNA表达的变化,探讨内源性EPO对缺氧神经元细胞的保护作用。
方法制备体外培养大鼠大脑皮质神经元细胞缺氧模型,分为正常对照组;缺氧12、24、48、72 h组。利用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应及蛋白质印迹观察细胞中EPO及其mRNA的表达,并在变化过程中观察培养液中乳酸脱氢酶来评估神经元细胞的活性。
结果免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应及蛋白印迹检测显示:缺氧组中EPO(20.79±2.98)及其mRNA(0.78±0.05)在12 h已有基本表达,与对照组(EPO:17.12±1.99;mRNA:0.39±0.05)比较,差异均有统计学意义(t=2.51,P<0.05;t=13.51,P<0.01);且48 h达高峰(EPO:28.88±3.41,mRNA:1.45±0.07),与对照组比较,差异有统计学意义(t=7.29,P<0.01;t=33.24,P<0.01);神经元细胞活性也最强。乳酸脱氢酶活性72 h后表达明显下降,各时间组之间比较差异同样具有统计学意义。
结论神经元细胞缺氧后使细胞内EPO及EPO mRNA的表达增强,且可增强神经元细胞的活性。提示EPO参与了神经元细胞缺氧的发生发展过程,在神经元细胞缺氧的过程中起重要作用。