洋葱假单胞菌G63脂肪酶基因及其伴侣基因的克隆和同源高效表达

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从油污土壤中筛选到一株脂肪酶活性较高的洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)G63。运用PCR的方法从该菌株中克隆了脂肪酶基因(lip A)及其伴侣基因(lipB)。该脂肪酶基因开放式阅读框(ORF)为1092bp,编码364个氨基酸残基。经KpnI/HindiⅢ酶切,将其克隆到广泛宿主质粒pBBR1Tp载体上,构建成质粒pBBR1-lipAB。通过三亲杂交,在辅助质粒pRK2013的帮助下,转入原宿主菌P.cepaciaG63中,构建成洳A基因同源高效表达的基因工程菌。该菌株在连续转接5
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