【摘 要】
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为获得同步化的人工种胚,以半夏疏松愈伤组织为试验材料,采用悬浮培养的方法,探讨温度、咖啡因、蔗糖浓度对半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化作用,为半夏人工种子制
【机 构】
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贵州大学生命科学学院,山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室,贵阳,550025
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为获得同步化的人工种胚,以半夏疏松愈伤组织为试验材料,采用悬浮培养的方法,探讨温度、咖啡因、蔗糖浓度对半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化作用,为半夏人工种子制作提供同步化种胚.结果表明:以MS为基本培养基,添加1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/LCH进行悬浮培养,温度为8℃,处理12h,恢复36h,同步化效果最好,细胞分裂指数为13.86％;咖啡因浓度为2.00 mmol/L,处理2 h,恢复48 h,效果较好,细胞分裂指数为9.42％;蔗糖浓度为40 g/L,处理5 d,恢复4 d,效果一般,细胞分裂指数为5.33％.分别先后继代3次于 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行膨大培养及MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+10 g/L sucrose+300 mg/L CH进行分化培养.温度处理组微细胞团为42.33个,种胚分化率为71.11％;咖啡因处理组微细胞团为34.33个,种胚分化率为55.56％;蔗糖处理组微细胞团为40个,种胚分化率为57.78％.因此,半夏悬浮培养细胞同步化形成人工种胚的适宜条件为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH,8℃处理 12 h,恢复36 h,再转接进膨大及分化培养基继续培养.本研究为半夏人工种子生产提供技术参考.
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