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摘 要：采用超高效液相色谱仪-紫外检测器，建立鸡肉组织中磺胺二甲嘧啶的检测方法。鸡肉组织中磺胺二甲基嘧啶用乙酸乙酯提取、0.1 mol/L盐酸溶剂转换、正己烷溶脂、MCX柱净化，在270 nm检测波长处用超高液相色谱仪-紫外检测器检测。结果表明：鸡肉组织中磺胺二甲嘧啶的保留时间为0.88 min，检出限为2.0 μg/kg，定量限为5.0μg/kg，在10～200μg/kg范围内添加回收率为60%～85%，相关系数R2=0.999 5该方法具有快速、简单、回收率高、重现性好、检测限低等优点。
关键词：磺胺二甲嘧啶；残留物分析；超高液相色谱
磺胺二甲基嘧啶是最广泛应用的磺胺类药物之一， 具有抗菌谱广、抗球虫和价廉易得等优点，至今仍在兽医临床和畜牧业中广泛应用，但食品残留和污染问题比较严重，据文献报道磺胺二甲基嘧啶具有致癌作用[1]。欧盟、美国、日本、韩国等国家均将磺胺二甲基嘧啶等磺胺类药物列为畜禽饲养过程中限制使用的药物，其动物组织最大残留限量一般为 50～100μg/kg[2]。
国内外文献报道的磺胺二甲基嘧啶的检测方法有微生物法、分光光度法、酶联免疫法、薄层色谱法、毛细管电泳法、高效液相液相色谱法（HPLC），鲜有报道使用超高效液相色谱法（UPLC）进行检测。 超高效液相色谱（UPLC），与传统的HPLC技术相比，提供了更高的效率，具有更强分离度、超高速度和超高灵敏度等优点。因此建立快速、准确、重现性好、适合批量检测的超高效液相-紫外检测法，检测鸡肉组织中磺胺二甲基嘧啶残留。
1 实验部分
1.1仪器
Waters ACQUITY UPLC 配紫外检测器；法国吉尔森固相萃取仪；瑞士BUCHI旋转蒸发仪；北京斯珀特氮空吹扫浓缩仪。
1.2 试剂与耗材
磺胺二甲基嘧啶对照品，Sigma公司购置。乙酸乙酯、乙腈、甲醇、甲酸、正己烷均为色谱纯；盐酸、氨水为分析纯；实验用水为超纯水；MCX柱60 mg/3 mL。
1.3 色谱条件
色谱柱：Waters UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7μm）流动相：流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：乙腈；A∶B（83∶17）； 流速：0.4mL/min； 检测器：紫外检测器；检测波长：270 nm； 柱温： 30 ℃； 进样量：5μL。
1.4 样品制备
称取均质试料（5±0.05）g，于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加乙酸乙酯20 mL，涡动2 min，4000 r/min离心5 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20 mL，重复提取1次，合并2次提取液。 鸡心瓶中加0.1 mol/L盐酸溶液4.0 mL，于40℃下旋转蒸发浓缩至少于3.0 mL，转至10 mL离心管中。用0.1 mol/L盐酸溶液2.0 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3.0 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡旋混和30 s，3 000 r/min离心5 min，弃正己烷。再次用正己烷3.0 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中，涡旋混和30 s，3 000 r/min离心5 min，弃正己烷，取下层液备用。
MCX柱依次用甲醇2.0 mL和0.1 mol/L盐酸溶液2 mL活化，取备用液过柱，控制流速1.0 mL/min。依次用0.1mol/L盐酸溶液1.0 mL和50%甲醇乙腈溶液2.0 mL淋洗，用洗脱液4.0 mL洗脱，收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干，加0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供超高效液相色谱测定。
1.5 标准曲线制作
精密量取10 μg/mL磺胺二甲嘧啶标准工作液，用流动相溶液逐级稀释，配制成浓度为 10、50、100、250、500、2 500 μg/L的系列混合标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。
2 结果
2.1标准色谱图和样品加标色谱图
按照以上测定方法得到磺胺二甲基嘧啶标准色谱图和样品加标色谱图（见图1），图中峰1为磺胺二甲基嘧啶。
2.2方法检出限、定量限和线性范围
在超高效液相色谱条件下， S/N>3时鸡肉组织中磺胺二甲嘧啶检出限为2.0μg/kg，S/N>10时鸡肉组织中磺胺二甲嘧啶定量限为5.0μg/ kg。磺胺二甲嘧啶质量浓度在10～2 500μg/ L内线性显著，峰面积（Y，μV·s）与其质量浓度（X，μg/L）线性方程为Y=4.95e+001X-1.15e+003，相关系数为0.999 5，详见图 2。
2.3回收率、准确度、精密度
GB/T 27404-2008动物性食品中兽药最高残留限量中规定动物组织中磺胺类药物最高残留限量（MRL）为100μg/kg，根据GB/T27404-2008实验室质量控制规范相关规定，本实验采用1/2MRL、MRL、2MRL三点水平进行平行添加计算回收率，每个样品重复测定6次计算精密度，根据日间三水平平行添加比较计算准确度，结果见表1。
我试验室三人采用该方法，对鸡肉组织中添加10～200μg/kg浓度水平的回收率均能达到60%～85%。
3 结论
文献报道使用高效液相法（HPLC）对动物组织中磺胺二甲基嘧啶残留检测出峰时间一般在4 min左右[2，3]，本实验利用超高液相（UPLC）检测，磺胺二甲基嘧啶出峰时间大约在0.88 min左右，明显缩短了检测时间，对于实际工作中进行大批量检测能大大节省时间，提高检测效率。（编辑：狄慧）
参考文献：
[1] 李国柱，陈灏，张广源.动物源性食品中磺胺类药物残留及控制对策[J]. 广东畜牧兽医科技， 2013， 38（4）：30-31.
[2] 林红英，陆桂萍，沈子龙.猪肉中磺胺二甲基嘧啶残留量的高效液相色谱法测定[J].江苏农业学报， 2006， 22（3）： 285-288.
[3] 张利环，张春善，韩河平.高效液相色谱法测定肉鸭组织中磺胺二甲基嘧啶的残留量[J].中国抗生素杂志， 2006， 31（5）：309-310.
关键词：磺胺二甲嘧啶；残留物分析；超高液相色谱
磺胺二甲基嘧啶是最广泛应用的磺胺类药物之一， 具有抗菌谱广、抗球虫和价廉易得等优点，至今仍在兽医临床和畜牧业中广泛应用，但食品残留和污染问题比较严重，据文献报道磺胺二甲基嘧啶具有致癌作用[1]。欧盟、美国、日本、韩国等国家均将磺胺二甲基嘧啶等磺胺类药物列为畜禽饲养过程中限制使用的药物，其动物组织最大残留限量一般为 50～100μg/kg[2]。
国内外文献报道的磺胺二甲基嘧啶的检测方法有微生物法、分光光度法、酶联免疫法、薄层色谱法、毛细管电泳法、高效液相液相色谱法（HPLC），鲜有报道使用超高效液相色谱法（UPLC）进行检测。 超高效液相色谱（UPLC），与传统的HPLC技术相比，提供了更高的效率，具有更强分离度、超高速度和超高灵敏度等优点。因此建立快速、准确、重现性好、适合批量检测的超高效液相-紫外检测法，检测鸡肉组织中磺胺二甲基嘧啶残留。
1 实验部分
1.1仪器
Waters ACQUITY UPLC 配紫外检测器；法国吉尔森固相萃取仪；瑞士BUCHI旋转蒸发仪；北京斯珀特氮空吹扫浓缩仪。
1.2 试剂与耗材
磺胺二甲基嘧啶对照品，Sigma公司购置。乙酸乙酯、乙腈、甲醇、甲酸、正己烷均为色谱纯；盐酸、氨水为分析纯；实验用水为超纯水；MCX柱60 mg/3 mL。
1.3 色谱条件
色谱柱：Waters UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7μm）流动相：流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：乙腈；A∶B（83∶17）； 流速：0.4mL/min； 检测器：紫外检测器；检测波长：270 nm； 柱温： 30 ℃； 进样量：5μL。
1.4 样品制备
称取均质试料（5±0.05）g，于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加乙酸乙酯20 mL，涡动2 min，4000 r/min离心5 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20 mL，重复提取1次，合并2次提取液。 鸡心瓶中加0.1 mol/L盐酸溶液4.0 mL，于40℃下旋转蒸发浓缩至少于3.0 mL，转至10 mL离心管中。用0.1 mol/L盐酸溶液2.0 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3.0 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡旋混和30 s，3 000 r/min离心5 min，弃正己烷。再次用正己烷3.0 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中，涡旋混和30 s，3 000 r/min离心5 min，弃正己烷，取下层液备用。
MCX柱依次用甲醇2.0 mL和0.1 mol/L盐酸溶液2 mL活化，取备用液过柱，控制流速1.0 mL/min。依次用0.1mol/L盐酸溶液1.0 mL和50%甲醇乙腈溶液2.0 mL淋洗，用洗脱液4.0 mL洗脱，收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干，加0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供超高效液相色谱测定。
1.5 标准曲线制作
精密量取10 μg/mL磺胺二甲嘧啶标准工作液，用流动相溶液逐级稀释，配制成浓度为 10、50、100、250、500、2 500 μg/L的系列混合标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。
2 结果
2.1标准色谱图和样品加标色谱图
按照以上测定方法得到磺胺二甲基嘧啶标准色谱图和样品加标色谱图（见图1），图中峰1为磺胺二甲基嘧啶。
2.2方法检出限、定量限和线性范围
在超高效液相色谱条件下， S/N>3时鸡肉组织中磺胺二甲嘧啶检出限为2.0μg/kg，S/N>10时鸡肉组织中磺胺二甲嘧啶定量限为5.0μg/ kg。磺胺二甲嘧啶质量浓度在10～2 500μg/ L内线性显著，峰面积（Y，μV·s）与其质量浓度（X，μg/L）线性方程为Y=4.95e+001X-1.15e+003，相关系数为0.999 5，详见图 2。
2.3回收率、准确度、精密度
GB/T 27404-2008动物性食品中兽药最高残留限量中规定动物组织中磺胺类药物最高残留限量（MRL）为100μg/kg，根据GB/T27404-2008实验室质量控制规范相关规定，本实验采用1/2MRL、MRL、2MRL三点水平进行平行添加计算回收率，每个样品重复测定6次计算精密度，根据日间三水平平行添加比较计算准确度，结果见表1。
我试验室三人采用该方法，对鸡肉组织中添加10～200μg/kg浓度水平的回收率均能达到60%～85%。
3 结论
文献报道使用高效液相法（HPLC）对动物组织中磺胺二甲基嘧啶残留检测出峰时间一般在4 min左右[2，3]，本实验利用超高液相（UPLC）检测，磺胺二甲基嘧啶出峰时间大约在0.88 min左右，明显缩短了检测时间，对于实际工作中进行大批量检测能大大节省时间，提高检测效率。（编辑：狄慧）
参考文献：
[1] 李国柱，陈灏，张广源.动物源性食品中磺胺类药物残留及控制对策[J]. 广东畜牧兽医科技， 2013， 38（4）：30-31.
[2] 林红英，陆桂萍，沈子龙.猪肉中磺胺二甲基嘧啶残留量的高效液相色谱法测定[J].江苏农业学报， 2006， 22（3）： 285-288.
[3] 张利环，张春善，韩河平.高效液相色谱法测定肉鸭组织中磺胺二甲基嘧啶的残留量[J].中国抗生素杂志， 2006， 31（5）：309-310.