【摘 要】
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目的 利用CD226基因敲除小鼠作为免疫动物,制备抗小鼠CD226单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 用真核表达的重组小鼠CD226蛋白免疫动物,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗小鼠
【机 构】
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空军军医大学基础医学院免疫学教研室,陕西西安710032
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目的 利用CD226基因敲除小鼠作为免疫动物,制备抗小鼠CD226单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 用真核表达的重组小鼠CD226蛋白免疫动物,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗小鼠CD226 mAb,进行流式细胞术、Western blot实验等应用的鉴定.建立夹心ELISA检测小鼠可溶性CD226的方法.应用已建立的夹心ELISA检测脂多糖诱导脓毒症小鼠血浆可溶性CD226浓度.结果 获得2株分泌小鼠抗小鼠CD226 mAb的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名为mA1.1和mA1.3,抗体亚类均为IgG1,轻链型均为K.鉴定发现所获得的mAb可以应用于流式细胞术,能够识别细胞表面外源性转染表达的CD226和小鼠血小板表面的CD226;可以应用于Western blot实验,结合相对分子量(Mr)为67 000的淋巴细胞膜蛋白,与CD226的Mr相符.用mA1.3 mAb包被酶标板,mA1.1 mAb标记辣根过氧化物酶或生物素,敏感度分别为3.0 ng/mL和0.25 ng/mL,检测脓毒症小鼠血浆中可溶性的CD226浓度较正常小鼠降低.结论 成功制备了识别小鼠CD226的小鼠mAb,可应用多种检测技术.
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