【摘 要】
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目的 探讨微管蛋白破坏对体外关节软骨细胞代谢功能的影响.方法 2月龄新西兰白兔8只,处死后取双膝关节全层软骨,采用常规0.4%链酶菌蛋白酶和0.025%Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨
【基金项目】
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国家重点基础研究发展规划(973计划);
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目的 探讨微管蛋白破坏对体外关节软骨细胞代谢功能的影响.方法 2月龄新西兰白兔8只,处死后取双膝关节全层软骨,采用常规0.4%链酶菌蛋白酶和0.025%Ⅱ型胶原酶依次消化为软骨细胞培养3 d贴壁后,分为对照组和实验组,对照组继续用原代培养基(90%DMEM/F12±10%胎牛血清)培养,实验组在原代培养基中加入微管蛋白破坏剂秋水仙素(终浓度为0.1μmol/L).加药后第1、2天用Annexin-Ⅴ/PI流式细胞术检测软骨细胞早期凋亡率,加药后第6天细胞爬片HE染色观察细胞形态的改变,加药后第3、6、9天取细胞用实时定量荧光反转录聚合酶链式反应法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖以及MMP-13 mRNA的表达量,同时在加药后第3、6、9天取细胞上清液,用ELISA法和阿尔新蓝法检测各组上清液中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量.结果 实验组第2天软骨细胞早期凋亡率明显高于对照组(P＜0.05);与对照组比较,实验组第6天软骨细胞呈不规则多角形,胞核深染且分裂象增多,细胞基质减少,实验组第3、6、9天软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达量较对照组均明显降低(P＜0.05),第6、9天实验组软骨细胞MMP-13mRNA表达较对照组明显增高(P＜0.01),同时实验组第3、6、9天上清液中的Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量均明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 微管蛋白破坏可致软骨细胞早期凋亡,导致体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖等基质成分合成减少,炎性因子MMP-13的表达增多.
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