【摘 要】
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选择游离甲状腺素(FT4)的羧基官能团为修饰位点,先用二碳酸二叔丁酯(Boc2O)保护氨基,再用HATU作为缩合剂与炔丙基胺通过酰胺键缩合,将端炔基引入FT4,然后在微量亚铜盐催化下
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选择游离甲状腺素(FT4)的羧基官能团为修饰位点,先用二碳酸二叔丁酯(Boc2O)保护氨基,再用HATU作为缩合剂与炔丙基胺通过酰胺键缩合,将端炔基引入FT4,然后在微量亚铜盐催化下与叠氮戊酸发生"Click Chemistry"反应,合成以三唑杂环作为"连接臂"的FT4人工半抗原(FT4H)。采用N-羟基琥珀亚胺活性酯法,将半抗原(FT4H)与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,合成免疫原(FT4H-BSA)和包被原(FT4H-KLH),免疫原(FT4H-BSA)的紫外吸收图谱相对于FT4H和BSA有明显差异,表明偶联成功,并计算得到偶联比为12∶1。用FT4H-BSA(2×10!3g/mL,0.1 mg/只)免疫6～8周龄的Balb/c小鼠,5次免疫后,经尾部取血,获得抗FT4血清,采用ELISA间接法测定抗体血清的效价可达1.28×105。结果表明,含有较强决定簇(三唑环)的连接臂未对抗体血清识别FT4产生较大的干扰,为制备小分子的人工抗原提供一种新的方法。
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