【摘 要】
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目的 研究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viruses,BVDV)N-端自身蛋白酶(Npro)的生物信息学特征及表达特性.方法 克隆NADL株BVDV Npro基因,利用生物信息学软件分析
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆163319;黑龙江省牛病防控工程技术研究中心,黑龙江大庆163319
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目的 研究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viruses,BVDV)N-端自身蛋白酶(Npro)的生物信息学特征及表达特性.方法 克隆NADL株BVDV Npro基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定.将纯化的重组Npro蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗Npro蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测.结果 PCR扩增的Npro基因全长504 bp,编码168个氨基酸,Npro基因与BVDV V026株属于同一分支.Npro蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主.重组表达质粒pET-28a-Npro经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组Npro蛋白相对分子质量约25000,纯化后纯度达95％以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价为1∶128000,特异性良好.结论 成功在大肠埃希菌中表达了BVDV Npro蛋白,表达的Npro蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV Npro蛋白的功能奠定了基础.
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