【摘 要】
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背景与目的:人乳头瘤病毒与宫颈癌的发生相关,核酶是一种能切割靶 RNA的特殊 RNA.本研究旨在探讨转染了靶向切割 HPV16E6 mRNA核酶的宫颈癌细胞株的表型,以及核酶对宫颈癌细
【机 构】
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第一军医大学珠江医院肿瘤中心,广东,广州,510282
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背景与目的:人乳头瘤病毒与宫颈癌的发生相关,核酶是一种能切割靶 RNA的特殊 RNA.本研究旨在探讨转染了靶向切割 HPV16E6 mRNA核酶的宫颈癌细胞株的表型,以及核酶对宫颈癌细胞增殖与调亡的作用.方法:计算机设计特异性切割 HPV16E6 mRNA的核酶,构建抗 HPV16E6核酶 (HRz)的真核表达质粒.以脂质体法将抗 HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入 CaSKi细胞,命名为 CaSKi- R和 CaSKi- P细胞. Northern杂交检测 3种细胞中 E6基因的表达.流式细胞仪检测 3种细胞的凋亡率,将 3种细胞在相差显微镜和荧光显微镜下观察,采用荧光 (Hoechst33342)染色和 TUNEL(TDT- mediated dUTP nick end labeling)两种方法测定细胞凋亡.流式细胞术测定 HPV16E6、 c- myc、 bcl- 2、 p53、 Fas等蛋白的表达.结果: RNA 点杂交证实核酶 mRNA能稳定表达于 CaSKi- R细胞中. Northern杂交证实 CaSKi- R中 E6 mRNA表达水平较 CaSKi细胞明显降低,而 CaSKi- P和 CaSKi细胞的 E6 mRNA表达水平无差异. CaSKi- R细胞凋亡率明显高于 CaSKi和 CaSKi- P细胞,细胞周期阻滞于 G2期, S期细胞百分率下降.抗 HPV16E6核酶能明显减少 CaSKi- R细胞中 HPV16E6、 c- myc、 bcl- 2蛋白的表达,增高 p53蛋白的表达;这种现象并不发生于 CaSKi- P细胞中. Fas蛋白的表达在 3种细胞中都相近.结论:抗 HPV16E6核酶的导入能诱导宫颈癌细胞凋亡,其原因可能在于病毒癌基因 E6表达的降低,以及由此而引起的细胞内一系列基因表达的改变,包括 c- myc、 bcl- 2、 p53等基因.
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