【摘 要】
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目的:探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制.方法:设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测辣椒碱(50,100,200,300,400,500,600,800,1000 μmol·L-1)处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预(200,400,800 μmol·L-1)后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测
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目的:探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制.方法:设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测辣椒碱(50,100,200,300,400,500,600,800,1000 μmol·L-1)处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预(200,400,800 μmol·L-1)后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(200,400 μmol· L-1)干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53(p-p53),抑癌基因[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)],活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3),cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA(mRNA)沉默技术作用TRPV1,观察200 μmol·L-1辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响.结果:与空白组比较,辣椒碱50,100 μmol·L-1作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200 μmol·L-1以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低(P＜0.01),呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800 μmol·L-1处理可明显诱导细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01);200,400 μmol·L-1辣椒碱干预下,细胞生长表现为G2/M期阻滞,800 μmol·L-1表现为G0/G1期阻滞(P＜0.05);与空白组比较,辣椒碱200,400 μmol·L-1处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白(p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP)的表达(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2蛋白表达显著下调(P＜0.01);沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡.
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