慢病毒介导短发卡RNA(shRNA)靶向抑制前列腺癌细胞株LnCaP、VCaP细胞的抑制神经前体细胞表达下调因子8(NEDD8)的表达，观察其对雄激素受体(AR)、前列腺特异性抗原(PSA)的表达以及细胞生物学行为的影响。
方法构建NEDD8短发夹RNA(NEDD8-shRNA)稳定转染的LnCaP、VCaP细胞株。实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及Western blot法检测NEDD8、AR及PSA mRNA及蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、Transwell™实验检测细胞侵袭能力。
结果NEDD8-shRNA慢病毒转染后，LnCaP、VCaP细胞NEDD8 mRNA表达量分别是空白对照组的(0.11±0.03)、(0.16±0.04)倍，AR mRNA表达量分别为(0.52±0.04)、(0.42±0.05)倍，PSA mRNA的表达量分别为(0.49±0.04)、(0.59±0.06)倍。慢病毒转染后，LnCaP、VCaP细胞NEDD8蛋白相对表达量分别为(11.26±2.65)%、(6.26±2.04)%，AR蛋白相对表达量分别为(30.36±4.35)%、(15.36±3.37)%，PSA蛋白相对表达量分别为(13.37±2.70)%、(11.36±2.67)%。与对照组比较，NEDD8、AR、PSA mRNA及蛋白表达均显著下降(P＝0.000)。慢病毒转染后，与对照组比较，LnCaP、VCaP细胞增殖显著抑制；转染后LnCaP、VCaP细胞株凋亡率分别为(15.08±1.23)%、(20.37±1.76)%，与对照组比较显著增加(P＝0.001、0.000)；穿膜细胞数显著减少(P＝0.000、0.004)，分别为(55.5±12.5)、(60.8±11.3)个。
结论NEDD8可能在转录水平参与了对AR表达调控，通过抑制NEDD8基因能有效抑制LnCaP、VCaP中AR表达及细胞的增殖、侵袭能力，诱导细胞凋亡。