【摘 要】
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目的:分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的IEC-6小肠上皮细胞源性外泌体miRNAs的表达差异.方法:以TNF-α(终浓度50 ng/mL)刺激IEC-6细胞4 h(TNF-α-exosome组)后收集上清液,外泌体提取试剂盒结合超速离心法分离提取上清液中的外泌体;使用透射电镜、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术和Western blot鉴定外泌体;提取外泌体miRNAs进行高通量测序,比较co
【机 构】
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广州中医药大学第二临床医学院I期临床研究室,广州510120
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目的:分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的IEC-6小肠上皮细胞源性外泌体miRNAs的表达差异.方法:以TNF-α(终浓度50 ng/mL)刺激IEC-6细胞4 h(TNF-α-exosome组)后收集上清液,外泌体提取试剂盒结合超速离心法分离提取上清液中的外泌体;使用透射电镜、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术和Western blot鉴定外泌体;提取外泌体miRNAs进行高通量测序,比较control-exosome组(IEC-6细胞以不含TNF-α的无外泌体血清培养基正常孵育)和TNF-α-exosome组外泌体miRNAs表达谱差异;采用TargetScan、miRDB和miRWalk 3个软件对有显著差异表达的miRNAs进行潜在靶基因预测;Cytoscape软件绘制显著差异表达miRNAs靶基因调控网络图;DAVID网站注释工具对潜在靶基因进行功能注释,以此进一步分析潜在靶基因的生物学功能.结果:在透射电镜下可以观察到大量外泌体结构,其分布不均匀,直径50～200 nm,呈圆形或椭圆形的脂质双层杯状囊泡;NTA检测显示其粒径主峰为141.9 nm,浓度为3.41×109 parti-cle/mL;Western blot结果显示外泌体表面标志蛋白CD63表达阳性;高通量测序筛选出6个显著差异表达(差异倍数＞2,P＜0.05)的外泌体miRNAs.与control-exosome组比较,TNF-α-exosome组rno-miR-125a-5p(差异倍数=3.6890)、rno-miR-351-5p(差异倍数=3.8031)、rno-miR-125b-5p(差异倍数=2.9330)、mo-miR-542-3p(差异倍数=2.9956)、rno-miR-30c-5p(差异倍数=3.0650)和miR-20a-5p(差异倍数=2.8908)均明显下调(P=0.001,P=0.002,P=0.025,P=0.019,P=0.022,P=0.032);运用靶基因预测网站对6个差异表达miRNAs靶基因预测,共得到潜在靶基因158个,并绘制miRNAs靶基因网络调控图;DAVID功能注释结果显示这些下调miRNAs主要参与了1个京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路和12个基因本体论(gene ontology,GO)_生物学过程(biological process,BP)、15个GO_细胞组分(cell component,CC)、3个GO_分子功能(molecular function,MF).结论:TNF-α诱导的IEC-6细胞来源外泌体中包含丰富的miRNAs,其表达谱有明显差异,高通量测序和相关数据库的联合运用对小肠上皮细胞外泌体miRNA的功能作用有了更深的了解,为小肠黏膜损伤相关疾病的发病机制研究提供了新视角.
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目的 探索医疗失效模式与效应分析在居家腹膜透析(腹透)患者管理的应用价值.方法 选取2020年1-6月该院腹透中心管理的居家规律腹透3个月及以上、年龄18～75岁患者68例作为研究对象,应用医疗失效模式与效应分析(HFMEA)对患者的管理进行风险评估,制订具体改进措施,比较该管理模式实施前后风险优先指数(RPN)值,以及患者居家腹透相关理论知识、腹透操作与外出口换药操作考核结果等.结果 应用HFMEA进行居家腹透患者管理后水肿、饮食与出入量不平衡、腹膜炎、心力衰竭、运动量不足等主要失效模式的RPN值明显下
目的:探索以肺炎链球菌胆碱结合蛋白A(pneumococcal choline binding protein A,rCbpA)为抗原的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)反应模型在肺炎球菌性社区获得性肺炎患者(community acquired pneumonia,CAP)检测中的应用价值.方法:设计合成cbpA基因序列引物,通过PCR扩增,构建克隆质粒PGM-T/cbpA和表达质粒.经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl phospho
目的:采用Clavien-Dindo/CTCAE并发症分类系统评估早期宫颈癌术后并发症并分析其危险因素.方法:回顾性分析2008年1月至2015年12月南阳医学高等专科学校第一附属医院412例早期宫颈癌患者的临床资料,排除未手术54例、不符合FIGO分期标准23例、临床资料缺失60例、随访退出27例,最终纳入248例早期宫颈癌患者,患者年龄44.5(25,85)岁,体质指数(body mass index,BMI)22.9(14.6,45) kg/m2,采用Clavien-Dindo/CTCAE分类系统对
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