【摘 要】
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目的 探讨甲醛固定石蜡包埋的黑素瘤组织中let-7a微小RNA(mieroRNA)的表达情况及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响.方法 选取黑素瘤蜡块13份,先天性色素痣蜡块10份,抽提microRNA,采用茎环引物逆转录为cDNA,然后采用Taqman MGB探针,相应的引物,进行实时荧光定量PCR.继而采用cy3标记的siRNA阴性对照物转染A375细胞,荧光显微镜下观察转染效率,最后将let-
【机 构】
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210042,南京,中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所,210042,南京,中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所,210042,南京,中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所,210042,
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目的 探讨甲醛固定石蜡包埋的黑素瘤组织中let-7a微小RNA(mieroRNA)的表达情况及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响.方法 选取黑素瘤蜡块13份,先天性色素痣蜡块10份,抽提microRNA,采用茎环引物逆转录为cDNA,然后采用Taqman MGB探针,相应的引物,进行实时荧光定量PCR.继而采用cy3标记的siRNA阴性对照物转染A375细胞,荧光显微镜下观察转染效率,最后将let-7a的模拟物转染入A375细胞,MTT实验检测转染后细胞增殖的变化.结果 从石蜡包埋组织中成功抽提出microRNA,而且定量PCR结果显示let-7a在黑素瘤中的表达明显低于色素痣组织(t=2.364,P＜0.05).荧光显微镜下观察siRNA转染效率约80%～90%,hsa-let-7a转染A375细胞后,使其增殖受抑,转染后24 h抑制率达32.7%.结论 let-7a在黑素瘤中表达下降,过表达let-7a可使A375细胞增殖受到抑制,提示其在黑素瘤中可能起抑癌基因样作用。
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