【摘 要】
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目的 探讨细胞质膜微囊蛋白-1(caveolin-1)对喉鳞状细胞癌生物学特征的影响.方法 构建caveolin-1真核表达质粒,用脂质体法转染喉鳞癌细胞株HEp2细胞,筛选出稳定高表达caveoli
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目的 探讨细胞质膜微囊蛋白-1(caveolin-1)对喉鳞状细胞癌生物学特征的影响.方法 构建caveolin-1真核表达质粒,用脂质体法转染喉鳞癌细胞株HEp2细胞,筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆,并用实时荧光定量PCR和免疫印迹法鉴定.MMT法用于检测细胞的生长能力,软琼脂克隆形成实验用于检测细胞锚定非依赖性生长能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,免疫印迹法检测表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的磷酸化水平,用激光共聚焦显微镜观察caveolin-1和EGFR的共定位.结果 成功构建了caveolin-1真核表达质粒,转染HEp2细胞后筛选得到3株稳定高表达caveolin-1的克隆.与对照组相比,转染后的细胞生长速度明显减慢,软琼脂中克隆形成能力明显下降.流式细胞仪结果显示,高表达caveolin-1可使细胞阻滞在G0/G1期,并且促进细胞的凋亡.激光共聚焦显微镜观察显示,caveolin-1与EGFR共定位于细胞膜.免疫印迹检测显示,caveolin-1能降低EGFR和Erk1/2的磷酸化水平.结论 caveolin-1能够抑制喉鳞癌细胞株HEp2的生长,并促进其凋亡;对EGFR-MAPK信号通路的负性调节可能在其抑癌机制中发挥重要作用.
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