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目的
利用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术联合经典核定位信号肽(cNLS)促进目的基因入核，提高转染效率。
方法用不同的方式将增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)转入293T细胞。实验分4组：UTMD＋pEGFP(对照组)，UTMD＋pEGFP＋cNLS(经典型组)，UTMD＋pEGFP＋mNLS(突变型组)和UTMD＋pEGFP＋cNLS＋WGA(入核阻滞组)。NLS和pEGFP分别用FITC和Cy3标记。转染6 h后，流式细胞仪检测Cy3阳性细胞百分比作为质粒入胞率，激光共聚焦显微镜观测细胞核中Cy3荧光强度占整个细胞荧光强度百分比作为质粒的入核率。转染48 h后，用流式细胞仪检测转染效率，CCK8检测细胞存活率，RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白的相对表达量，并比较上述指标在4组间的差异以评价cNLS在UTMD介导基因转染中的作用。
结果①转染6 h后，带绿色荧光标记的NLS在细胞内不同部位显示，经典型组大量入核，突变组细胞质和细胞核均可显示，入核阻滞组主要聚集在细胞质，未能入核；②转染6 h后，4组质粒的入胞率分别为(61±11)%、(80±10)%、(55±9)%和(58±10)%；入核率分别为(20±4)%、(50±11)%、(18±3)%和(10±3)%，经典组入核率和入胞率最高，入核阻滞组最低，差异有统计学意义(P<0.05)。③转染48 h后，4组细胞活性均>80%；转染效率、mRNA和蛋白相对表达量均在经典组最高，入核阻滞组最低，差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论UTMD联合cNLS能提高pEGFP入核率，从而提高目的基因转染效率。